[发明专利]藉由毛细管电泳定量分析胶原蛋白的方法及套装试剂

说明书

技术领域

本发明有关一种胶原蛋白定量分析的方法，尤指一种藉由毛细管电泳定量分析胶原蛋白的方法及套装试剂。

背景技术

在动物体内，胶原蛋白(collagen)广泛且大量存在于结缔组织的细胞外间质(extracellular matrix)中。胶原蛋白被发现为主要组成韧带、肌腱、骨胳以及软骨等的物质，而上述组织用来支持或提供张力用；而于皮肤中，胶原蛋白与角蛋白(keratin)则负责维持表皮弹性与强度，目前文献中将胶原蛋白根据其结构以及氨基酸(或称为胺基酸)组成区分为二十余型态(type)，称为胶原蛋白家族(collagen families)，任何一种型态的胶原蛋白发生遗传上的缺陷，都可能导致极为严重的疾病，如成骨不全症(osteogenesis imperfecta)等。各特定型态的胶原蛋白分子为由三股多胜肽链相互聚合而成螺旋缠绕结构(triple-helical structure)，可以藉由不断的降解、生成或重组的过程，调整组织中胶原蛋白的型态与含量，因此，胶原蛋白对于伤口的复原亦扮演重要角色。在目前研究中指出，胶原蛋白为一使用于治疗愈后以及疾病活性程度的可能生物标记(Moseley etal.，2004，Br J Dermatol 150：401-413)。甚者，在组织工程领域，如具有胶原蛋白的支架是用来作为生物细胞再生的环境(Ruszczak，Z.，2003，Adv Drug Deliv Rev 55：1595-1611)，因此如何准确侦测胶原蛋白的含量以评估胶原蛋白的重组与降解速率为临床应用的重要课题。

过去定量胶原蛋白多利用比色分析法(colorimetric analysis)来侦测胶原蛋白上的羟脯氨酸(hydroxyproline，或称为羟脯胺酸)含量，以推定胶原蛋白的含量(Stegemann et al.，1967，Clin Chim Acta 18：267-273；Moore，S.，1968，J Biol Chem 243：6281-6283)；后续亦发展出利用灵敏度与专一性更高的高效液相层析法(high performance liquidchromatography，HPLC)或者液相层析串连质谱仪(liquid chromatographytandem mass spectrometry，MS)以定量胶原蛋白(Ikeda et al.，1993，JChroma togr 621：133-138；Kindt et al.，2000，Anal Biochem 283：71-76)；然而上述方法流程冗长，相当耗时耗力，所需样品量高，层析管的再生利用率有限，更可能因为长时间处理导致胶原蛋白的变质影响结果。此外，另一高灵敏性的定量方法，酵素连结免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)(Bellon，G.，1985，Anal Biochem150：188-202)，则因过程繁琐、价格高昂以及抗体专一性等问题，亦无法成为一种胶原蛋白的理想定量及鉴别的方法。