[发明专利]一种抗erbB2人源抗体MIL-5及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗erbB2人源抗体以及其制备方法和用途。

背景技术

erbB2基因定位于人17号染色体的17q21位置，该基因转录的mRNA全 长为4.8kbp，其开放阅读框架全长为3765bp，编码1255个氨基酸。其中， 第1～21位氨基酸为信号肽序列，胞外区有632个氨基酸，跨膜区由高度疏水 的22个氨基酸组成，C-末端的580个氨基酸位于胞质内。erbB2胞外区四个 结构域分类模式为：D1(第22～195位氨基酸)、D2(第196～320位氨基酸)、 D3(第321～488位氨基酸)、D4(第489～632位氨基酸)。其中，D1和D3 主要由疏水性的氨基酸组成，特别是亮氨酸，三个平行的β片层构成β螺旋 结构。D2和D4由二硫键模块构成，1～2个二硫键组成小的结构单位，为富 含半胱氨酸区，分别含26和21个半胱氨酸。迄今为止，尚未发现与erbB2 高亲和力、高特异性结合的配体。

ErbB2同源或异源二聚体的形成伴随着细胞内的C末端酪氨酸残基的磷 酸化，引起细胞内含SH2、SH3和PTB结构域的蛋白活化，募集、激活下游 相关蛋白，通过信号级联反应，导致细胞增殖及分化。临床研究发现，ErbB2 高表达的肿瘤患者往往对放化疗不敏感，且易发生肿瘤的转移，患者预后不 佳。ErbB2在多种肿瘤组织中过表达，包括乳腺癌(25～30％)、卵巢癌(18～ 43％)、非小细胞肺癌(13～55％)、前列腺癌(5-46％)、胃癌(21-64％)、头 颈部肿瘤(16-50％)等上皮细胞来源的恶性肿瘤^[21]，而在成人正常组织中表 达水平很低或不表达，因而成为肿瘤免疫治疗的理想靶分子，也是目前肿瘤 治疗研究的热点。

2003年，临床用抗erbB2抗体Herceptin与erbB2相互作用复合物晶体结 构得到解析，结果提示，Herceptin识别erbB2的功能表位位于D4结构域N 端557～561、570～573、593～603位氨基酸残基。同时，临床试验表明，人源 化抗erbB2单抗Herceptin仅用于ErbB2过表达乳腺癌的临床治疗，而且， 单独应用的疗效有限，其有效率仅为11.6～16％。

随着erbB2晶体结构的精确解析，其结构特征受到人们的广泛关注。尽管同 属于EGFR(Epidermal growth factor receptor)超家族，与EGFR、erbB3结构相 比，非激活状态时erbB2分子的D1和D3间接近的程度超过了激活状态(即EGFR、 erbB3与其配体结合状态)下EGFR、erbB3的D1和D3的接近程度。由于该结构 特征，与EGFR、erbB3不同，erbB2较难与配体结合，使其成为“孤受体”。在 上述结构特征的维持下，非激活状态的erbB2以一种“开放”(open)的结构模 拟激活状态受体(EGFR、erbB3)的构象，D2区更为凸出、暴露，使其成为EGFR 家族其他成员首选的异源二聚体伴侣分子。大量的实验表明，D2区的C末端在形 成异源二聚体的过程中发挥重要的作用。功能性抗体2C4能特异性识别erbB2的 D2结构域，阻断erbB2功能的抗体。目前，该抗体已进入临床前研究。

虽然抗erbB2抗体Herceptin已经应用于临床治疗乳腺癌，功能性抗体 2C4也已经进入临床前研究，但是这些抗体的生物学活性有待进一步提高。

本发明即基于上面的研究背景，通过人源抗体库筛选高亲和力的新型抗 erbB2人源抗体，并通过实验验证其生物学活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有临床应用价值的抗erbB2人源抗体。

本发明提供了一种抗erbB2人源抗体，其结构包括人源恒定区和可变区； 其重链可变区选自：SEQ_ID NO：1、SEQ_ID NO：3或SEQ_ID NO：5；其 轻链可变区选自：SEQ_ID NO：2、SEQ_ID NO：4或SEQ_ID NO：6。

本发明提供了这种抗体的制备方法，主要包括以下步骤：

a、构建天然的人源噬菌体抗体库；

b、构建表达人erbB2胞外段全长基因的重组细胞株；

c、从人源噬菌体抗体库中筛选抗erbB2的噬菌体抗体；

d、利用基因工程手段，获得人源抗体；

e、对获得的抗体的结合活性、特异性、亲和力以及生物学功能等进行 鉴定。