[发明专利]EV71病毒广谱性单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域的病毒免疫学检测及技术领域，具体涉 及一种可中和EV71病毒A、B、C三种基因型病毒的广谱性单克隆抗体、 分泌该单克隆抗体的细胞株、制备方法及该单克隆抗体的用途。

背景技术

近年来，手足口病已经成为越来越威胁国内儿童健康的广泛流行 性疾病之一。手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流 行的报道。该病于1957年在新西兰首次报道。1958年分离出柯萨奇病 毒，1959年提出手足口病名称。手足口病的早期病原体主要为Cox A16 型，而1969年美国在中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离出肠道 病毒71(亦称为“EV71病毒”)，并被首次确认。此后EV71感染与Cox A16 感染交替出现，成为手足口病的主要病原体。20世纪70年代中期，保 加利亚、匈牙利相继暴发以中枢神经系统为主要临床特征的EV71流行， 1975年保加利亚报告病例750例，其中149人致瘫，44人死亡。1994年 在英国暴发了Cox A16引起的手足口病，患者大多为1-4岁婴幼儿。根 据英国1963年以来的流行病学数据显示，手足口病流行的间隔期为2-3 年。20世纪90年代后期，EV71引起的手足口病开始在东南亚地区流行， EV71感染常引起患者发生严重的中枢神经系统症状，死亡率较高。1997 年马来西亚发生了主要由EV71引起的手足口病，其中，4-8月间共有 2628人发病，4-6月间共有29例病人死亡。除此之外，1998-2001年手 足口病在新加坡的流行以及2007年该病在中国的流行等均引起了大规 模的疾病暴发。

近年，EV71在亚太地区的流行呈逐年上升趋势，国内1981年上海 首次报道本病；此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、 青海和广东等十几个省市均有报道。1983年天津暴发了Cox A16引起的 手足口病，5-10月间发生了7,000余病例。经过2年低水平散发后，1986 年再次暴发。1995年武汉病毒研究所从手足口病人中分离出EV71，1998 年深圳市卫生防疫站从患者标本中分离出EV71。1998年台湾暴发了大 规模的EV71疫情，估计发病人数达150万，其中重症405例，死亡78例， 大多为5岁以下的幼儿。2000年80,677人发病，291例重症感染者，41 人死亡；2001年389例重症感染者，55人死亡。2007年山东临沂、青岛 和济南等地发生主要由EV71引起的手足口病流行，其中报告病例近4 万，报告死亡病例14例。

EV71可引起严重的并发症。随着EV71病毒的流行在亚太地区呈 上升趋势，不断引起的中枢神经系统症状导致儿童死亡。我国尤其是 南方地区一直存在EV71病毒的活动，人群尤其5岁以下人群EV71抗 体阳性率普遍较低，与其他国家和地区(台湾)的研究结果类似，提 示EV71病毒对人群尤其是幼儿的危害依然存在，一旦条件具备，将有 可能发生暴发和流行。

由于无疫苗、药物等特异性的防控手段，该病存在隐性感染和轻 症病例多，传染源难以发现和控制，儿童普遍易感，传播途径多，难 以有效阻断等原因，预防控制EV71带来的手足口病难度较大。由于 EV71引起的手足口病影响范围的广泛性、危害的严重性，该病在我国 已纳入丙类传染病管理。因此，EV71病毒疫苗的抗原含量检测，保护 性表位研究，治疗性单克隆抗体的制备，具有广泛的应用范围和社会 需求。

EV71属于微小核糖核酸病毒科(Picornaradae)肠道病毒属 (Enterovirus)的成员。EV71病毒的基因组为7408核苷酸的单股正 链RNA。该基因组仅含有一个开放阅读框(编码含有约2194个氨基酸 的多聚蛋白)，其后为85个碱基的3’非编码区。所编码的多聚蛋白 可进一步水解成P1，P2和P3三个前体蛋白，P1前体蛋白被进一步活 化为1A(多肽VP1)、1B(多肽VP2)、1C(多肽VP3)和1D(多肽 VP4)四个病毒结构蛋白；四种结构蛋白拼接成五聚体结构；五聚体形 成亚单位结构，60个亚单位构成病毒粒子。P2和P 3前体蛋白主要编 码7个非结构蛋白，编码蛋白水解酶及RNA聚合酶，P3区在进化过程 中高度保守。VP1作为主要的衣壳蛋白，具有最多的型特异性中和位 点，其基因序列与病毒血清型具有较高的相关性。