[发明专利]一种日本血吸虫虫卵抗体磁微粒分离酶联免疫检测方法

权利要求书

1、一种日本血吸虫虫卵抗体磁微粒分离酶联免疫方法，其特征在于检测步骤为：

(1)加样与免疫反应：在试管中加入5-100μL血清样本、阳性质控品或阴性质控品，然后加入20-100μL，0.1-10mg/mL的磁分离试剂，混匀后，37℃温育5-30分钟；

(2)洗涤：使磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬30秒，然后再次使磁微粒在磁场中沉降，去除上清液。如此重复2-4次。

(3)加入酶标试剂：在每一试管中加入生物酶标记的日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Schistosoma japonicum soluble egg antigen，Sj-SEA)工作溶液30-120μL，混匀后，37℃温育5-30分钟；

(4)洗涤：使磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬30秒，然后再次使磁微粒在磁场中沉降，去除上清液。如此重复2-4次。

(5)加底物溶液：每管加入50-300μL生物酶催化的显色或发光底物，混匀后，37℃温育5-30分钟。

(6)终止显色(仅适用于显色法)：每管加入100-300μL终止液，并放在磁分离器上分离10分钟；

(7)读值：在分光光度计或发光强度检测仪上读取吸光度或发光强度值。

2、根据权利要求1所述的磁分离试剂，其特征在于：是日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Sj-SEA)与磁微粒的连接物，并进一步混悬在缓冲液中的混悬液。所述的磁微粒直径在0.1-5.0μm之间，具有超顺磁性和磁场响应性，表面含有氨基(NH2-)或羧基(COOH-)活性基团。所述的Sj-SEA与磁微粒的连接可以通过化学交联剂，如戊二醛、1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride(EDC)等以共价键的形式，也可以通过物理吸附(静电作用、离子键或疏水作用等)的形式。其工作浓度为0.25-8mg/ml。

3、根据权利要求1所述的酶标试剂，其特征在于：是Sj-SEA与生物酶的连接物，并溶解在缓冲液中的溶液。所述的生物酶可以是辣根过氧化物酶(HRP)，也可以是碱性磷酸酶(ALP)。生物酶与Sj-SEA的连接方法可以通过过碘酸钠氧化法、戊二醛法或Succinimidyl4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate(SMCC)、2-Iminothiolane·HCl(2IT)交联法等多种方法。其工作浓度为0.5-5μg/mL。