[发明专利]抗hAPE1蛋白的抗体及其制备方法与应用该抗体的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAPE1蛋白)的抗体及其制备方法以及应用该抗体的ELISA试剂盒。 

背景技术

近年来，随着医学技术的飞速发展，肿瘤标志物的检测已成为肿瘤临床诊断的常规手段之一，其原理是检测肿瘤患者肿瘤细胞特异表达的异常蛋白质或表达增高的蛋白质，从而为肿瘤的诊断和疗效评估提供参照，达到早期发现、早期诊断和早期治疗的目的。 

人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(human Apurinic/apyrimidinicendonuclease/redox effector factor，hAPE1)是DNA碱基切除修复(baseexcision repair，BER)途径的关键限速酶，是一种多功能蛋白质。hAPE1蛋白是迄今发现的生物大分子中最具结构和功能特点的一个典范：其一级结构含有318个氨基酸，分子量35423Da，空间结构呈四层的α/β三明治型，主要由N端和C端两个有所重叠的功能域构成，N端是一个不规则的柔性结构区域，为氧化还原调控区；C端是一个致密的球形核酸酶结构域，为DNA修复内切酶活性区。正是这种双重结构使hAPE1具有多种生物功能：它能够与OGG1、XRCC1、PCNA、FEN1以及多聚酶β等蛋白质相互作用，同时激活BER通路中的长、短通路，修复烷化和氧化引起的DNA损伤；能够发挥3′-磷酸二酯酶和3′-5′核酸外切酶活性，分别在修复辐射引起的DNA损伤和切除DNA脱氧 核糖核苷类似物中发挥重要作用；同时，hAPE1还具有氧化还原功能，可通过氧化还原机制调节多种转录因子的DNA结合活性及下游靶基因表达，参与氧化应激、细胞周期调控及凋亡等多种关键的细胞反应。受控的转录因子包括与细胞增殖、分化、转化和凋亡相关的重要因子如NF-κB，AP-1，Egr-1，p53，PEBP2，Myb，HIF-1α及Pax5、8等，这些转录因子与肿瘤的生成、发展以及放化疗抵抗密切相关。 

机体各器官组织中均有hAPE1蛋白的表达，而国内外的研究均表明，肿瘤组织中的hAPE1定位和表达与相应的正常组织有显著差异。此外，通过检测肿瘤组织中hAPE1及相关因子的表达，发现其表达水平与肿瘤放化疗抵抗密切相关。因此，hAPE1的表达水平和/或类型可能作为筛选某些肿瘤的辅助手段，hAPE1有望成为肿瘤早期诊断中一项敏感而特异的指标。 

1999年，Dianova等人制备纯化了hAPE1多克隆抗体并应用于细胞实验，但其来源于免疫动物的血清，可识别多个抗原表位，因此特异性较低，且存在种属交叉反应的问题。单克隆抗体是针对某一抗原表位的特异性抗体，纯度高，特异性强。然而目前大多数hAPE1的单克隆抗体的抗原表位未知，个别单克隆抗体虽表位已知，但抗体来源于合成的多肽，其表位为线性表位，而非构象型表位。 

抗原表位(epitope)也称为抗原决定簇(antigenic determinant，AD)，是抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，是抗原分子表面的一小部分，其大小相当于相应抗体的结合部位，由5～7个氨基酸、单糖或核苷酸所组成。抗原表位可分为连续性抗原表位(又称线性表位，见于T细胞表位和部分B细胞表位)和不连续抗原表位(又称构象型抗原表位，只见于B细胞抗原表位)。每一个抗原表位的性质和空间构型决定着一种特异性，是使免疫应答和免疫反应具有特异性的物质基 础，与生物机体免疫调节网络密切相关。 

近来的研究发现，抗原的线性表位在体液免疫中有重要的作用，而构象型表位则与某些免疫应答发生改变或疾病状态有关。因此，寻找针对天然hAPE1蛋白的构象型表位的抗体对检测疾病状态下如肿瘤的hAPE1蛋白具有极其重要的意义。 

目前国内外对hAPE1检测的研究方法大都为免疫印迹和免疫组化法，这两种均需取组织样品进行hAPE1检测，操作步骤繁琐，处理时间长，成本高，效率低。发明人于前期研究中发现，肿瘤患者和已行放、化疗的肿瘤患者其血清中hAPE1蛋白表达显著增高，因此，对hAPE1进行血清学检测有助于肿瘤的早期临床诊断，并有效判断肿瘤细胞放疗和化疗的敏感性。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抗体，其与脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1蛋白76-90位(其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示)和109-123位(其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示)构成的构象型表位特异性结合。