[发明专利]一种人RBPMS多肽及其抗体制备方法

说明书

1.技术领域

本发明涉及一种多肽及其抗体制备方法，这种抗体主要用于天然蛋白抗原的检测。

2.背景技术

1)RBPMS功能：RBPMS是RNA结合蛋白RRM家族的一个成员，RRM结构域长度为80-100氨基酸，家族成员包括1-4个拷贝的该结构域。RRM结构域包括两个叫做RNP1和RNP2短的伸展的保守序列，和一些高度保守的疏水残基。RBPMS在N末端有一个单一的，假想的RRM结构域。该蛋白广泛表达，表达水平因蛋白亚型和组织而异。有研究标明，RNA结合蛋白在Smad介导的转录活性的调控中发挥作用，RBPMS有可能通过促进Smad2和Smad3在C末端磷酸化以及Smad蛋白的核累积来刺激Smad介导的转录激活(Nucleic Acids Res.2006；34(21)：6314-26.Epub2006 Nov 11)。该蛋白在非洲爪蟾(Xenopus)中的同源蛋白hermes的序列和表达模式表明，hermes参与了心脏发育过程中转录后调控(Mech Dev.1999 Jan；80(1)：77-86)。

2)RBPMS抗体产品信息：经检索，除我公司产品外，市场上没有其他Anti-RBPMS多克隆抗体。

3)RBPMS抗体的应用：

一个用阵列比较基因组杂交(Array comparative genomic hybridization)的研究发现，在去分化肝癌和13号染色体长臂(13q)缺失的肝癌中，RBPMS基因显著上调，肝癌的去分化与参与细胞周期调控和增值的一些基因的上调有关(Mod Pathol.2008 Dec；21(12)：1479-89.Epub 2008 Sep 26)。这就提示我们，该靶蛋白有可能在不久的将来成为一个潜在的具有基础研究和临床应用价值的肿瘤标志物。

3.发明内容

本发明提供了一种RBPMS多肽，其序列为：DSRSEAEAAKNALN。用此多肽制备的抗RBPMS抗体可以在免疫印迹(Western blot)及免疫组化(IHC)分析中特异识别组织或细胞中的天然RBPMS蛋白。

抗RBPMS抗体是通过以下步骤获得的：

步骤一：多肽序列的分析和设计：利用DNAstar软件对RBPMS蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估亲水性，抗原性，表面可能性，柔性区等指数，再结合过去制备抗体的实际经验，最终确定RBPMS蛋白69-82位14个氨基酸作为合成多肽氨基酸序列，序列为DSRSEAEAAKNALN。

步骤二：多肽合成和交联：采用ACT396全自动多通道多肽合成仪合成目的多肽，并采用质谱进行鉴定；为增强多肽的抗原性，将RBPMS多肽与载体蛋白KLH采用Sulfo-SMCC交联法进行交联。

步骤三：多肽免疫和抗血清制备：将交联后的RBPMS-KLH与弗氏佐剂混合乳化，在新西兰兔背部进行皮内注射免疫，并反复加强免疫，至取血检测抗体效价达到标准时停止免疫。

步骤四：抗体纯化：实验兔抗体效价达到标准后，采用心脏取血，分离抗血清，采用Protein A纯化全抗体后，进一步采用肽亲和纯化，得到目标抗体。

抗RBPMS抗体是通过以下步骤鉴定的：

步骤一：免疫印迹：将所获得的RBPMS抗体作为一抗，采用标准的免疫印迹方法，确认该抗体能够与变性后的天然RBPMS蛋白相互作用，可用于免疫印迹试验。

步骤二：免疫组化：将所获得的RBPMS抗体作为一抗，采用标准的免疫组化方法，用于检测组织芯片(9种组织胎儿组织)，确认该抗体能够与具有天然结构的RBPMS蛋白相互作用，可用于免疫组化试验。

4.附图说明

图1为免疫印迹图(Western blot)

图2为免疫组化(IHC)图

5.具体实施方式

1.多肽序列的分析和设计

利用DNAstar软件对RBPMS蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估亲水性，抗原性，表面可能性，柔性区等指数，再结合过去制备抗体的实际经验，考虑氨基酸结构复杂程度，易氧化程度，合成难度，氨基酸类别和分布等，最终确定RBPMS蛋白69-82位14个氨基酸作为合成多肽氨基酸序列，序列为DSRSEAEAAKNALN。同时，为保证后期多肽交联载体蛋白以及肽亲和纯化，在N末端增加一个半胱氨酸C，最终待合成多肽序列为DSRSEAEAAKNALN。