[发明专利]生物发酵工程双项深培养液体菌种的方法

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种好气菌种和厌气菌种的液体培养方法，特别是：一种改进了振动、通气、循环，搅拌发酵方法的食用菌、药用菌、农用菌、工业用菌的液体菌种的培养方法和装置。

目前多种好气菌生产，特别是食用菌生产，栽培用菌种的获得，普遍采用多级固体扩大培养方法，但该方法操作繁琐，劳动强度大，培养时间长达20-25天，菌龄不一致且易衰老，生产成本也相当高昂，近年来，已开始将工业发酵液体培养好气菌的方法使用到食用菌栽培，播种用菌种的获得，用液体菌种栽培平菇、风尾菇、金顶磨菇等，已能使出菇时间大为缩短，与固体菌种相比，液体菌种具有接种方便、菌龄一致以及生长快等优点。

目前多种有益的厌氧气菌，大多数是用固体培养方法来培养，但是用量大时，无法满足生产需要，用液体培养菌种，不仅速度快，菌种的质量和产量都比固体菌种好。

二、背景技术：

培养液体菌种所需设备设资多，技术要求高，用量不太大的液体菌种可以用摇床来生产，瓶中的液体菌种量只能占容量的五分之一，若要获得大量液体菌种，还必须用发酵罐。

1、对比文献见附图1提供了这种食用菌培养的工艺流程，投资额都在几十万元到几百万元以上，工厂小不仅产值少，而且效率也低，加之食用菌栽培具季节性，即使大型液体培养菌种工厂，经济效益也不佳，并且一大罐菌种在几吨以上，生产一旦不慎，菌种就会污染变质。日本、西欧和台湾地区的食用菌产量都很大，发酵技术也先进，但至今未建有大规模生产液体食用菌种的工厂。

2、对比文献见附图2提供了一种小型的通气发酵培养的工艺流程，这种工艺流程和装置投资额需在几十元到几百元左右。到现在为止，还是没有实际应用到生产中来，原因是这套装置见附图3在一级时还可以，但是到二、三级时发酵瓶或罐就出问题了，由于发酵瓶或罐二级、三级液体量大了，通气大时，液体容易挥发，培养液会浓缩，菌种所需营养会变浓，这样就会影响菌种的质量，但自然产量就会下降，气量小时培养液不会受影响，但是搅拌不了，培养液中的菌种会停止生长或死亡，这就是它的不足之处。

3、文献中关于厌氧气菌种的培养方法，目前还是按教课书的厌氧菌种的分离和培养技术，主要是用铜柱系统除氧，再应用(享盖特厌氧滚管装置培养)本技术有材料说明(无附图)。

三、发明内容：

本发明的目的是改进原有的好气菌种和厌氧气菌种的液体菌种培养方法，并设计了一套(振动小气量通气、搅拌、接种器连接为一体、经恒温发酵箱培养的装置)简化为一体化装置。

本发明的技术特征是：1、振动通气过滤、发酵装置和注入发酵瓶内的培养液和管道经常规灭菌处理后，进行无菌操作而联结成多级密封管道系统，采用灭菌棉花球过滤的小气量恒温、深层通气、振动、搅拌、循环、培养。

2、先用铜柱除氧系统除氧，除氧后配制的培养液注入发酵瓶或罐内，经常规灭菌处理后进行真空泵抽空箱抽真空，经无菌操作采用恒温发酵箱(恒温、振动循环)培养。

四、发明内容附图说明：

下面结合附图说明详细叙述本发明的实施技术方案：

1、附图4是合乎本发明主题的工艺流程示意图

2、附图5是合乎本发明主题的装置示意图

参照附图5，按已知配方配制好培养液，并注入发酵瓶或罐(1)(2)(3)(容量可以为0.5升、5升、15升)使培养液占据发酵瓶或罐，容积的五分之一以上，最佳为十分之七。瓶口安上打有穿过进、排气及采样玻璃管用孔的橡皮塞(4)(5)(6)带有球形膨大内腔的进、排气用玻璃管(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14)并在球形内腔内以1.2-1.5克/立方厘米的密度，均匀充填满普通的未脱脂的洁净棉花，供抽样检验和扩大培养时级间密封连通的玻璃或金属质分叉多通管(14)(15)(16)(17)和优质橡皮管及必要时起启闭作用的管夹(18)(19)(20)(21)(22)(23)(24)(25)(26)(27)(28)将上述(1)-(33)装置及培养液作常规灭菌处理(所谓的常规灭菌，是指经常用的普遍性的灭菌方法，有立式、卧式高压蒸气灭菌锅，经1.2公斤/平方厘米，30分钟灭菌处理。市面有售不作附图说明)然后在火焰上作无菌操作，至少应关闭(22)(24)(28)处的前提下联结成如附图5所示的多级密封管道系统。为了使培养液中的菌种处于所要求的最佳生长温度，将盛有培养液的发酵瓶或罐，置于能进行温度控制的环境中进行培养，本实施方案中具体采用了一个能自动调温的电子数控发酵箱，它具有正负温差准确的优点。(市面有售不作附图说明)