[发明专利]一种绿茶糖蛋白的质量控制方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物的质量控制领域，具体涉及绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的质量控制傅立叶红外光谱方法。具体讲是一种应用数学分析和傅立叶红外光谱分析技术对绿茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白进行有效的质量监控的方法，该方法是通过傅立叶红外二阶导数光谱进行分析获得构成绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的两种主要单糖组分阿拉伯糖和半乳糖的特征峰；将向量夹角余弦方法应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱的比对，获得绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱可变区、保守区和相似性，该方法应用于样品绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白与标准品比对，从而能够对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品进行有效的质量控制。

背景技术

阿拉伯半乳聚糖蛋白广泛存在于高等植物中，它对植物细胞的生长发育起到关键作用，同时也是很有潜力的人健康免疫调节剂，也有报道其对肠胃溃疡具保护作用、对血糖血脂有一定的调节作用。阿拉伯半乳聚糖作为可溶性的非粘性膳食纤维已广泛应用于食品中，易溶于水的特性使其能够高浓度添加到饮料中而不改变饮料的味道、口感和粘度。它还被用作香料和色素的助悬剂和减缓糖果硬化速度辅助剂。因此，它的理化特性和保健功能使其在食品工业和医药工业中具有广泛的应用前景。从绿茶中提取获得阿拉伯半乳聚糖蛋白，其分子量在40～150kDa之间，其中蛋白成分约占总质量的10％以下，阿拉伯糖与半乳糖的摩尔比在2∶1～1∶1之间。由于我国的绿茶产量居世界前列，每年的绿茶产品中还包含许多低档产品以及一些粗老茶以及一部分陈茶，对于如何有效的开发利用这类资源，增加绿茶产品的附加值，从中开发具生物活性的成分尤为重要。

但是，绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白同其它多糖类产品一样，其质量控制方法是其应用过程中亟待解决的问题。因为，它们的理化性质和生物活性会因为不同的生产工艺、不同的原料来源和组成、分子量分布等因素而发生变化，甚至是很大的改变。如果对其不能进行有效的质量控制，则将极大的限制该类产品的应用和开发。通常，总糖含量被用作控制多糖提取物含量和质量的一个监测指标，但该指标具有很大的局限性，因为它既不能反映多糖组成的变化也不能反映产品活性与组成、结构的关系。

现有的对多糖类产品进行质量控制的方法，有高效液相色谱法监测其分子量和纯度、有测定其总糖含量监测其多糖成分所占百分比、有测定其单糖组成成分，但是这些指标在实施起来很难整体全面的反映多糖产品的质量，也不能比较多糖不同批次产品之间的生物学活性差异。其中有些方法操作繁琐，费时费力，难以适应工业生产应用。

红外光谱技术被广泛应用于药物的化学成分鉴定和结构分析，由于其指纹图谱性、无损伤性以及可重复性等优点而被许多国家的药典采纳并广泛应用于药物鉴定。但现有技术未能用红外光谱技术对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的进行鉴定和质量控制。

发明内容

本发明的目的在于建立能快速鉴定绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱的方法。

本发明的另一目的在于将本发明的指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法后应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的质量控制。

本发明采用以下技术方案予以实现：

通过对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白制备方法，红外导数图谱和红外导数图谱波数区间的选择，红外导数图谱上对应的组成成分的特征峰的确定，确定了绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外二阶导数指纹图谱。进一步将此指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法确定该指纹区域中的保守区域和可变区域。这样该指纹图谱可以满足对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的检测和分析。还进一步将此指纹图谱结合向量夹角余弦相似度法用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品的质量控制。

本发明的具体方案如下：

1.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的提取：

绿茶叶45℃烘干后，打磨成粉末后用80％乙醇浸提其中的色素和多酚类物质后，45℃烘干，以1∶20(w/v)料水比75℃，水浸提1h。浸提液经过过滤再400g离心10min，获得的上清液经冷冻干燥后得到绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白粗品，在阴离子柱Q Sepharose Fast Flowcolumn(20mm×60cm)，pH 8.0下NaCl梯度洗脱，收集第二洗脱峰中主要多糖组分，冷冻干燥后的产品成分主要为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白。

2.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取及鉴定：