[发明专利]抑制SARS冠状病毒N蛋白表达的小干扰RNA分子及其编码基因

说明书

本申请是2005年3月25日提交的申请号为200510057000.6专利申请的分案。

技术领域

本发明涉及抑制SARS冠状病毒N蛋白表达的小干扰RNA分子及其编码基因。

背景技术

引起严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的病原体SARS-CoV为一种新型的冠状病毒，具有棘突蛋白S(spike)，基质蛋白M(matrix)，包膜蛋白E(Envelope)和核蛋白N(Nuclear protein)等数种主要结构蛋白(HolmesKV.SARS-associated coronavirus.N Engl J Med，2003，348(20)：1948-51.)。研究表明，S蛋白是该病毒的主要保护性抗原，N蛋白和M蛋白也可以诱导免疫效应，特别是N蛋白具有较强的免疫原性。SARS-CoV N蛋白由422个氨基酸残基组成，相对分子质量48KD，其编码基因的长度为1268bp，是SARS-CoV主要的结构蛋白，在冠状病毒颗粒中，N蛋白位于病毒颗粒的核心部分和基因组RNA结合(Marra MA，JonesSJ，Astell CR，et al.The genome sequence of the SARS-associatedcoronavirus.Science，2003，300(5624)：1399-1404.；Wang J，Ji J，Ye J，et al.The structure analysis and antigenicity study of the N protein of SARS-CoV.Genomics Proteomics Bioinformatics，2003，1(2)：145-154.)。以往对动物冠状病毒结构蛋白的研究表明，N蛋白在病毒复制和产生的病理反应中起重要作用(HiscoxJA，Wurm T，Wilson L，et al.The coronavirus infectious bronchitis virusnucleoprotein local izes to the nucleolus.J Virol，2001，75(1)：506-512.)。但目前，尚未有直接而有效的抑制SARS-CoV的方法。

RNA干扰技术(RNAi)是在小双链RNA(dsRNA)分子的介导下特异性降解靶基因的生物技术，能使基因表达沉默，达到拮抗靶基因和实现生物(基因)治疗目的。长度为21到22个碱基的所谓小干扰RNA(siRNA，small interfering RNA)介导特异性干扰反应，只降解与其高度互补的特定基因的mRNA(Elbashir，S.M.，Harborth，J.，Lendeckel，W.et al.，Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNAinterference in cultured mammalian cells，Nature，2001，411(6836)：494)。RNAi技术因其在疾病治疗方面具有巨大潜力而备受关注。迄今为止，有关siRNA可诱导产生针对SARS病毒基因RNA的干扰效应，从而使该病毒的复制和蛋白表达受到抑制对细胞形成保护作用，在ncbi上已有一些报道，但针对SARS-CoV N蛋白设计的siRNA未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供可抑制SARS冠状病毒N蛋白表达的小干扰RNA分子及其编码基因。

本发明所提供的抑制SARS冠状病毒N蛋白表达的小干扰RNA分子，是下述1)和2)中的至少一个双链RNA序列：

1)正义链具有序列表中序列1的核苷酸序列，反义链具有序列表中序列2的核苷酸序列；

2)正义链具有序列表中序列3的核苷酸序列，反义链具有序列表中序列4的核苷酸序列。

将具有1)的双链RNA序列命名为siRNA1，其反义链与SARS-CoV N mRNA(序列表中的序列9)的213-233位置序列5’GGGCGUUCCAAUCAACACCAA 3’互补。序列表中序列1由21个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端；序列表中序列2由21个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端。