[发明专利]含有外源性内表位的病毒颗粒

说明书

本申请是申请号为00816753.2，申请日为2000年10月13日，发 明名称为“含有外源性内表位的病毒颗粒”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及肽在病毒粒子上的表达，尤其是肽在病毒衣壳内的表 达。

背景技术

疫苗是生物医学科学和公众健康方面的巨大进步之一。在二十世纪 初，感染性疾病在美国广为传播，使人口付出了巨大的代价。例如，1900 年，报道了21,064个天花病例，其中894个病人死亡。1920年，报道 了469,924个麻疹病例，其中7575个病人死亡；报道了147,991个白 喉病例，其中13,170个病人死亡。1922年，报道了107,473个百日咳 病例，其中5099个病人死亡。这些疾病大部分在美国已经被消灭了。

尽管取得了这些成功，但是就世界范围来说，每年还有超过500 万的婴儿死于可用现有疫苗预防的疾病。然而，许多现有疫苗必须冷藏 保存，这就使得它们在发展中国家的分发较为困难。而且，还有针对具 有显著发病率或死亡率疾病的疫苗尚未发明或是不能得到的情况。举例 而言，每年有超过2.5亿人慢性感染乙肝病毒，疟疾导致100-200万人 丧生；估计腹泻疾病(例如，由rotovirus、sp.志贺氏杆菌、霍乱弧 菌和毒素产生型大肠杆菌引起的感染)每年夺去超过估计的400-500 万人的生命。

疾病控制中心已经识别了几个用于获得全部可能的疫苗的因素。 (www.cdc.gov/epo/mmwr/preview/mmwrhtml/00056803.htm)。这些建议 包括寻找疫苗释放和使用的新方法。一种方法是开发刺激两种免疫反 应：B细胞介导的体液免疫反应和辅助T细胞介导的细胞免疫反应的疫 苗。

但是，尝试产生同时刺激体液和细胞免疫反应或优先诱导细胞免疫 反应疫苗的努力遇到了困难。例如，合成肽疫苗和重组蛋白质疫苗通常 免疫源性差，易于诱导体液免疫反应，不能诱导细胞免疫反应。DNA疫 苗可以同时诱导体液和细胞免疫反应。但是，问题是长期的抗原表达将 导致何种后果。

因此，本领域需要改善疫苗的释放机制。特别是，释放机制应该有 助于诱导细胞和体液免疫反应。

发明概述

本发明涉及肽在病毒颗粒上的表达，尤其是肽在病毒外壳或以内的 表达。在一些实施方案中，本发明提供了包含嵌合病毒粒子的化合物， 该嵌合病毒粒子具有一个蛋白质外壳，其中该蛋白质外壳具有内外表 面，在所述的蛋白质外壳的内表面上该衣壳至少包括一个外源肽。在一 些优选实施方案中，病毒粒子能在宿主细胞或组织里装配。在一些实施 方案中，病毒粒子是二十面体结构。在一些优选实施方案中，病毒粒子 是一种豇豆花叶病毒组。在一些特别优选实施方案中，病毒粒子是豇豆 花叶病毒。在一些实施方案中，外源肽插入到病毒粒子的一种外壳蛋白 中。在一些优选实施方案中，外源肽具有5到20个氨基酸。在其它优 选实施方案中，外源肽在外壳蛋白从氨基端的第5到20个氨基酸位点 之间插入，这样在宿主细胞中这种病毒粒子的装配也可发生。在一些特 别优选实施方案中，外源肽是插入到位于第11位点的酪氨酸残基和第 12位点的重复酪氨酸残基之间豇豆花叶病毒的VP-S中的。在其它特别 优选的实施方案中，外源肽是插入到位于包括第10位点的缬氨酸残基 和第11位点的酪氨酸残基的二肽和包括第12位点的缬氨酸残基和第 13位点的酪氨酸残基的重复二肽之间豇豆花叶病毒的VP-S中的。在其 它优选实施方案中，外源肽插入到位于第10位的缬氨酸残基和第11 位的重复缬氨酸残基之间的豇豆花叶病毒的VP-S中的。在更多的实施 方案中，病毒粒子不包含核酸。

在其它实施方案中，外源肽编码一个能被动物免疫系统识别的表 位。在一些优选实施方案中，外源表位是细胞毒性的T型淋巴细胞表位。 在特别优选实施方案中，外源表位包括具有来自自然产生表位源的侧面 氨基酸的细胞毒性的T型淋巴细胞表位。在一些实施方案中，外源肽是 T型辅助细胞的表位。在一些优选实施方案中，外源表位包括具有来自 自然产生表位源的侧面氨基酸序列的T型辅助细胞的表位。在其它更多 实施方案中，外源表位是B细胞表位。在更多的实施方案中，外源肽包 括具有来自自然产生的表位源的侧面氨基酸序列的T型辅助细胞的表 位。