[发明专利]通过重组藻类表达FAEES及新型体内生产生物柴油的方法

权利要求书

1.一种利用藻类油脂及其用于制备生物柴油的生物技术方法。其特征在于，包括利用藻类体内油脂与外界加入的乙醇发生酯交换反应制备生物柴油的方法，即通过基因工程技术将一个能表达脂肪酸乙脂合成酶(以下称之为FAEES)活性的基因转入进去，在藻类体内表达的FAEES就能在一定的条件下催化藻类体内的脂肪酸与外界加入的(外源)乙醇反应，得到生物柴油，副产物为甘油。

2.按权利要求一所述利用藻类油脂及其用于制备生物柴油的生物技术方法。其特征在于，所述利用藻类油脂及其用于制备生物柴油的步骤如下：

1)基因克隆：克隆脂肪酸乙脂合成酶基因，如人肝脏细胞脂肪酸乙酸乙脂合成酶FAEES基因。

2)质粒构建。将FAEES基因连接到质粒pUC19中，得到FAEES+pUC19。制备大肠杆菌感受态细胞，转化大肠杆菌。

3)质粒扩增。在大肠杆菌中扩增质粒。提取质粒。

4)构建表达载体。用Xho I和Xba I酶切质粒pUC19，电泳，胶回收目的基因。再用Xho I和Xba I酶切质粒pKy71，得粘性末端。J将FAEES基因连接到质粒pKy71中，得到FAEES+表达载体。

5)转化农杆菌。制备农杆菌感受态细胞，用上一步得到质粒转化农杆菌。

6)转染藻类：转化后的农杆菌与藻类共培养，使FAEES基因插入藻类基因组中。

7)基因表达：洗去农杆菌后，大量培养转基因藻类。

8)藻类生物大量培养在含乙醇的培养基中。

9)脂肪酸乙酯的检测

检测脂肪酸的含量变化。当含量不再变化时，破碎藻细胞经分离收集培养混合物，以催化工艺生产生物柴油，副产物为甘油。

3.按权利要求二所述生产的生物柴油。

4.权利要求包括脂肪酸乙脂合成酶和脂肪酸甲脂合成酶，在生物柴油(脂肪酸乙脂和脂肪酸甲脂)的体内和体外生物合成应用。

5.按权利要求所述的藻类包括小球藻，微藻，常见的藻类和其他不常见藻类，淡水和咸水藻类。