[发明专利]布鲁氏菌疫苗及疫苗用抗原蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 200910145908.0 | 申请日： | 2009-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN101607081A | 公开（公告）日： | 2009-12-23 |
| 发明（设计）人： | 曹小安;邱昌庆;周继章;郑福英;蔺国珍;宫晓炜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | A61K39/10 | 分类号： | A61K39/10;A61P31/04;C12N15/81;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 | 代理人： | 张 晋 |
| 地址： | 730046甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 布鲁氏菌 疫苗 抗原 蛋白 制备 方法 | ||
1.布鲁氏菌疫苗，其特征在于疫苗所用的抗原蛋白是一种布鲁氏菌bcsp31 重组蛋白，这种重组蛋白是以从流产布鲁氏菌2型CVCC12株中提取的细菌总 DNA为模板，用特异性引物P1和R1进行扩增，所用的特异性引物序列P1和 R1序列为：
P1：5’-cgcgaattcaccccacaggccagaacatttttccg-3’，含EcoR I酶切位点
R1：5’-gctgcggccgctttcagcacgcccgc-3’，含Not I酶切位点，
经扩增后得到的表达蛋白的前面引入了acccca编码的2个氨基酸，使蛋白前端 形成环形结构的bcsp31，克隆获得bcsp31蛋白基因，然后转入酵母表达载体中， 获得重组表达载体，将重组表达载体导入酵母表达细菌中，获得重组毕赤酵母 表达菌，增殖并进行诱导表达重组毕赤酵母表达菌，经分离纯化得到抗原蛋白。
2.权利要求1所述疫苗用重组抗原蛋白的制备方法，其特征是以从流产布 鲁氏菌2型CVCC12株中提取的细菌总DNA为模板，用特异性引物P1和R1 进行扩增，所用的特异性引物序列P1和R1序列为：
P1：5’-cgcgaattcaccccacaggccagaacatttttccg-3’，含EcoR I酶切位点
R1：5’-gctgcggccgctttcagcacgcccgc-3’，含Not I酶切位点，
经扩增后得到的表达蛋白的前面引入了acccca编码的2个氨基酸，使蛋白 前端形成环形结构的bcsp31，克隆获得bcsp31蛋白基因，然后转入酵母表达载 体中，获得重组表达载体，将重组表达载体导入酵母中，获得重组毕赤酵母表 达菌，增殖并进行诱导表达重组毕赤酵母表达菌，经分离纯化得到抗原蛋白。
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