[发明专利]一种生物样品中蛋白质组的分析方法有效
申请号: | 200910146883.6 | 申请日: | 2009-06-11 |
公开(公告)号: | CN101685080A | 公开(公告)日: | 2010-03-31 |
发明(设计)人: | 高尚先 | 申请(专利权)人: | 高尚先 |
主分类号: | G01N27/62 | 分类号: | G01N27/62;G01N1/28;G01N33/68;G01N33/574 |
代理公司: | 北京元中知识产权代理有限责任公司 | 代理人: | 王明霞 |
地址: | 100068北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物 样品 蛋白质 分析 方法 | ||
1.一种生物样品中蛋白质组的分析方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)生物样品预处理:在生物样品中加入1~2倍体积的U9尿素缓冲液,放置5~10分钟 后加入1~2倍体积的pH 3.55~3.95、30~40mmol/L的醋酸钠溶液,得到生物样品预处 理溶液;其中,所述的U9尿素缓冲液中含有9mol/L尿素、2%CHAPS、50mmol/LTris 盐酸、1%DTT,pH为9.0;
(2)纳米磁珠处理:在步骤(1)得到的生物样品预处理溶液中加入纳米磁珠,置于磁铁上 孵育10~30min后弃去液体,加入1~2倍体积的pH 3.55~3.95、30~40mmol/L的醋酸 钠溶液,置于磁铁上孵育1~5min使纳米磁珠结合肿瘤标记物,弃去液体;在纳米磁珠中 加入质量百分比浓度为5%三氟醋酸溶液,洗脱1~5min,得上清液;
(3)质谱分析:将步骤(2)得到的上清液进行蛋白质谱分析,得到指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的蛋白质组的分析方法,其特征在于,所述的纳米磁珠为弱阳离子交 换型纳米磁珠。
3.根据权利要求1所述的蛋白质组的分析方法,其特征在于,在步骤(1)和(2)中加入的 醋酸钠溶液的pH为3.65~3.85。
4.根据权利要求3所述的蛋白质组的分析方法,其特征在于,所述的醋酸钠溶液的pH为 3.75。
5.根据权利要求1所述的蛋白质组的分析方法,其特征在于,所述的生物样品包括血清、血 浆、唾液、精液、淋巴液和尿液。
6.根据权利要求1所述的蛋白质组的分析方法,其特征在于,在步骤(2)中,加入pH 3.55~ 3.95的醋酸钠溶液,置于磁铁上孵育1~5min使纳米磁珠结合肿瘤标记物,弃去液体;重复 1~3次后加入质量百分比浓度为5%三氟醋酸溶液进行洗脱。
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