[发明专利]P基因的干扰靶位点序列和小干扰核酸及组合物和应用

说明书

技术领域

本发明是关于P基因的干扰靶位点序列和小干扰核酸及组合物和应用，更确切地说，本发明涉及P基因的干扰靶位点序列，用于抑制P基因表达的小核酸，以及含有该小干扰核酸的化妆品组合物和该小干扰核酸在制备用于抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素的化妆品组合物中的应用。

背景技术

黑色素(melanin)是由黑素细胞合成的一种生物多聚体，由皮肤、毛囊、虹膜和视网膜的黑色素细胞产生，分为黑棕色的真黑素和红黄色的褐黑素。动物与人的皮肤和毛发颜色与黑素体的数目、大小和分布等都有直接的关系。过量的黑色素会使皮肤变黑，而非均匀分布的黑色素会导致黄褐斑和祛斑的产生。

随着生活水平和生活质量的提高，人们对美的关注也日益增强，美白、去斑就是其中很重要的一项内容。因此，开发一种能够抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素的产品称为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的第一个目的是提供P基因的干扰靶位点序列。

本发明的第二个目的是提供一种用于抑制P基因表达的小干扰核酸。

本发明的第三个目的是提供一种含有所述小干扰核酸的化妆品组合物。

本发明的第四个目的是提供所述小干扰核酸在制备用于抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素的化妆品组合物中的应用。

RNA干扰技术的出现为抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素提供了一种新的途径。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应基因的表达或使该基因沉默的过程。RNA干扰技术又被形象地称为基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene silencing)，是一种典型的转录后基因调控方法，又称转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。最早有关RNA干扰的报道出现在1990年，由两个不同的研究小组同时报道了转基因植物中的RNA干扰现象，以后又在线虫、果蝇、斑马鱼和小鼠等几乎所有真核生物中观察到了RNA干扰现象。1999年，Hamilton和Baulcombe在发生RNA干扰的植物中检测到了长度为21-25个核苷酸的RNA片段，这些RNA片断被证明是RNA干扰所必需的，称为小分子干扰RNA(小干扰核酸)。双链小干扰核酸与细胞源性的相关酶和蛋白质形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)。在RNA干扰过程中，双链小干扰核酸中的正义链被排除出复合体，反义链指导RISC结合到靶mRNA的相应位点，然后由复合物中的核糖核酸酶III降解靶mRNA，从而关闭靶基因的表达。

本发明人对黑色素的合成以及沉积进行了细致的研究，发现黑色素是由多个基因相互协调并经过一系列复杂的生理生化过程合成，这些与色素沉着相关的基因参与黑色素的合成、运输和分布。在与黑色素生成有关的一系列基因中，P基因是其中很重要的一个基因。

P基因也叫OCA2基因，负责合成P蛋白。P蛋白是110kDa的跨膜蛋白，由838个氨基酸残基构成，含有12个跨膜区，6个糖基化位点，位于黑色素小体膜上，与黑色素小体膜的完整性有关，是产生黑素小体所必需的蛋白。另有研究结果表明，P基因编码的蛋白与一些参与阴离子转运的膜转运蛋白具有显著同源性，它作为一种膜通道蛋白可减少黑素小体内质子的浓度，参与黑色素小体内pH值的调节，使局部环境呈中性，这有利于维护高分子酪氨酸-TYRP1-TYRP2复合体的稳定性，增强酪氨酸酶活性，增加黑色素的生成及沉积。

此外，P基因的变异会导致黑素细胞数量的减少以及黑素细胞中黑色素合成的降低，P基因的编码产物为真黑素合成所必需，因此，通过RNA干扰而专一性地抑制P基因的表达，从而沉默P基因的活性，是抑制黑色素合成、改善肤色的有效途径。

本发明提供了P基因的干扰靶位点序列，其中，该靶序列具有如SEQ IDNos：2-16中之一所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种小干扰核酸，其中，该小干扰核酸包括能够在严格条件下与所述干扰靶位点序列进行杂交的核苷酸序列。

本发明还提供了一种用于抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素的化妆品组合物，其中，该化妆品组合物含有所述小干扰核酸作为活性成分。

本发明还提供了所述小干扰核酸在制备用于抑制黑色素生成和沉积或祛除黑色素的化妆品组合物中的应用。