[发明专利]通过导入NOTCH基因将骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞或骨骼肌细胞的方法

权利要求书

1.治疗有效量的神经前体细胞在制备用于治疗患有脊髓损伤、脑 血管损伤、青光眼或神经退化症的患者的药物组合物中的用途；

其中所述神经前体细胞通过包括以下步骤的方法体外产生：

(1)从骨髓分离骨髓基质细胞，和在添加了血清的标准基本培养 基中培养所述细胞；和

(2)将编码由Notch细胞内结构域组成的蛋白的核酸导入所述细 胞，和进一步培养所述细胞以生成所述神经前体细胞。

2.治疗有效量的神经细胞在制备用于治疗患有脊髓损伤、脑血管 损伤、青光眼或神经退化症的患者的药物组合物中的用途；

其中所述神经细胞通过包括以下步骤的方法体外产生：

(1)从骨髓分离骨髓基质细胞，和在添加了血清的标准基本培养 基中培养所述细胞；

(2)将编码由Notch细胞内结构域组成的蛋白的核酸导入所述细 胞，和进一步培养所述细胞；和

(3)在所述培养基中加入环腺苷酸增多剂和/或第一细胞分化刺 激因子，和进一步培养所述细胞以生成所述神经细胞，其中所述第一 细胞分化刺激因子选自碱性成纤维细胞生长因子，睫状神经营养因子 及其混合物，其中所得分化细胞是导入了所述核酸的骨髓基质细胞的 子代。

3.治疗有效量的多巴胺能神经元在制备用于治疗患有脊髓损伤、 脑血管损伤、青光眼或神经退化症的患者的药物组合物中的用途；

其中所述多巴胺能神经元通过包括以下步骤的方法体外产生：

(1)从骨髓分离骨髓基质细胞，和在添加了血清的标准基本培养 基中培养所述细胞；

(2)将编码由Notch细胞内结构域组成的蛋白的核酸导入所述细 胞，和进一步培养所述细胞；

(3)在所述培养基中加入环腺苷酸增多剂和/或第一细胞分化刺 激因子，其中所述第一细胞分化刺激因子选自碱性成纤维细胞生长因 子，睫状神经营养因子及其混合物，并进一步培养所述细胞；

(4)在补充了血清的标准基本培养基中培养步骤(3)中获得的 细胞；和

(5)在所述培养基中加入神经胶质源性神经营养因子，环腺苷酸 增多剂，碱性成纤维细胞生长因子和血小板衍生的生长因子-AA，和进 一步培养所述细胞以获得所述多巴胺能神经元，

其中所得多巴胺能神经元是导入了所述核酸的骨髓基质细胞的子 代。

4.治疗有效量的乙酰胆碱能神经元在制备用于治疗患有脊髓损 伤、脑血管损伤、青光眼或神经退化症的患者的药物组合物中的用途；

其中所述乙酰胆碱能神经元通过包括以下步骤的方法体外产生：

(1)从骨髓分离骨髓基质细胞，和在添加了血清的标准基本培养 基中培养所述细胞；

(2)将编码由Notch细胞内结构域组成的蛋白的核酸导入所述细 胞，和进一步培养所述细胞；

(3)在所述培养基中加入环腺苷酸增多剂和/或第一细胞分化刺 激因子，其中所述第一细胞分化刺激因子选自碱性成纤维细胞生长因 子，睫状神经营养因子及其混合物，并进一步培养所述细胞；

(4)在补充了血清的标准基本培养基中培养步骤(3)中获得的 细胞；和

(5)在所述培养基中加入神经生长因子，环腺苷酸增多剂，碱性 成纤维细胞生长因子和血小板衍生生长因子-AA，和进一步培养所述细 胞以获得所述乙酰胆碱能神经元；

其中所得乙酰胆碱能神经元是导入了所述核酸的骨髓基质细胞的 子代。