[发明专利]一种延长大麦白粉病菌株保存期的方法

说明书

技术领域

本发明涉及作物病原菌保存方法的技术领域，尤其涉及一种大麦白粉病菌单孢菌株的保存方法。

背景技术

大麦是世界主要的粮食作物之一，其播种面积仅次于小麦、水稻和玉米，居第四位。我国大麦面积和总产次于水稻、小麦、玉米和粟，居第5位。大麦可作饲用、食用、啤用和保健食品。大麦白粉病是大麦的主要病害之一，多发生在世界潮湿、半潮湿的大麦产区，在中国大部分大麦产区都有发生，主要发生在冬大麦区，尤其在西南地区和东南沿海地区发病较重。近年来，由于氮肥使用量增大，种植密度增高，种植品种单一及暖冬气候的影响，大麦白粉病害日益严重，可造成20～30％的产量损失。

大麦白粉病是由布氏白粉病菌大麦专化型(Blumeria graminisf.sp.Hordei L.，简称Bgh)引起的真菌病害，其病原菌是专化性的活体寄生菌，属子囊菌纲白粉菌目。该病菌主要危害叶片，严重时也可危害叶鞘、茎秆和穗部，从幼苗到成株，均可被病菌侵染。病原菌丝以吸器进入寄主细胞内吸收养分和水分生长扩展，寄主表面被菌丝体覆盖后，一方面影响了光合作用，另一方面其角质层被破损，气孔的作用丧失，呼吸作用和蒸腾作用失控，因而导致全株营养不良，麦苗早衰，易倒伏，麦粒秕瘦，产量降低。大麦白粉病菌与寄主之间存在着“基因对基因”的关系，因而可利用含有不同抗性基因的大麦鉴别寄主将大麦白粉菌单孢菌株区分为不同的致病型。但大麦白粉病菌的毒性变异较快，随着专化性抗病品种的大面积推广，其品种抗性几年内就会丧失。因此通过分析大麦白粉菌群体的毒性结构、分布和动态，可对抗病基因发挥作用的有效区域进行评价和预测，为前瞻性育种提供依据。用分离保存的不同大麦白粉病菌致病型菌株接种大麦品种，可全面、准确评价品种的抗病性，鉴定大麦品种的抗白粉病基因，寻找新抗源，通过合理利用和布局抗病基因可有效控制大麦白粉病。

分离和保存不同的大麦白粉病菌致病型菌株，是开展大麦白粉病菌毒性基因遗传学研究及病原和寄主互作关系研究的先决条件。但大麦白粉病菌是一种专性寄生菌，只能在活的寄主组织上生长发育。该菌生活史可分为有性生长阶段和无性生长阶段。其中，无性生长阶段的大麦白粉病菌营养体为菌丝体，主要在大麦叶表面寄生，通过产生分生孢子进行无性繁殖，并从无性生长发育后期的菌丛中产生有性繁殖器官闭囊壳，从而进入有性生长阶段。其中的雄器和产囊体配合后，通过质配、核配和减数分裂产生子囊孢子，子囊孢子生长发育后产生菌丝体后又进入到无性生长阶段。在适宜的温度、湿度和光照条件下，大麦白粉病菌无性生长阶段产生的分生孢子可寄生在有生活力的特定大麦品种的叶片上，并可重复产生；而大麦有性繁殖器官闭囊壳在菌丝无性生长发育后期产生，子囊孢子的生成则需要通过质配、核配和减数分裂，故其繁殖后代会发生变异，一般不宜通过有性繁殖保存菌株。因此，大麦白粉病菌株主要是利用其分生孢子侵染感病的活体大麦叶片，并每隔一段时间在活体大麦叶片上转接分生孢子的方式进行保存。因为大麦白粉菌在麦叶上进行无性生长的过程中会不断吸收营养，导致组织坏死，腐生菌孳生繁衍，营养体短时间内会污染失活，难以长时间保存，常规条件下只能保存8-10天；同时分生孢子在频繁转接过程中，一方面需耗费大量人力、物力，另一方面往往会产生交互感染，致使特定的致病型菌株会在无意中丢失。此外，目前文献报道中有关保存小麦白粉病菌株方法的还有：(1)将菌株接种到离体叶段上，置于盛有保鲜剂的水琼脂培养皿中，加盖，在低温下可保存40天；(2)将菌株接种到试管苗上，低温下可保存40天，但具体的操作方法未见详细说明；(3)盆钵中生长的麦苗套管隔离，将菌株接种到生长的麦苗上，低温下可保存60天，但该法占用的空间较大、耗能多，转接时需取出带菌叶片，费时且容易产生交互感染。

因此，人们迫切希望在实验室条件下，寻求一种操作简便、省时省力、节能、并能减少交互感染，大幅延长大麦白粉病菌株保存时间的方法，以便于开展大麦白粉菌毒性变异及寄主和病原菌互作关系的研究。

发明内容

本发明目的是，针对现行大麦白粉病原菌在大麦活体保存上所存在的保存期短、费时、费工及在频繁转接过程中易产生交互感染等的缺陷，提出一种操作简便、省时省力、并能减少不同菌株间的交互感染，能较长时间保存大麦白粉病菌株的方法，以确保大麦白粉病病原菌相关研究工作的正常开展。

本发明目的通过以下技术方案来实现。

一种延长大麦白粉病菌保存期的方法，该方法按以下步骤进行：