[发明专利]一种用蟾皮微波萃取脂溶性蟾酥的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蟾酥提取方法，具体涉及一种用蟾皮微波萃取脂溶性蟾酥的方法。

背景技术

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥制成。其性味甘、 辛温，有毒。具有解毒、消肿、醒神、开窍、强心和抗肿瘤等功效。蟾酥含有多种化学 成分，主要分为脂溶性部分和水溶性部分。脂溶性蟾酥包括酯蟾毒配基、华蟾酥毒精和 蟾毒灵。目前提取蟾酥的方法主要是在加热条件下用有机溶剂回流提取，常用的有机溶 剂为乙醇、丙酮或石油醚，用色谱柱吸附分离，常用的色谱柱为树脂柱或硅胶柱，然后 逐步洗脱、干燥得到脂溶性蟾酥提取物，目前常规提取温度一般不大于60℃，提取时间 较长，一般超过1小时，虽然提取时间较长但提取率仍较低，若在提取时间较长情况下 又提高提取温度，则脂溶性蟾酥易变性；树脂柱或硅胶柱虽能分离得到脂溶性蟾酥，但 分离率不高，纯度较低，纯度较低的脂溶性蟾酥也易变性。如申请号为200610070105.X 的中国发明专利申请，就公开了用重量是干蟾皮重量9倍或10倍的80％或95％乙醇提 取90分钟或120分钟，然后用大孔树脂柱吸附分离，用水、低浓度乙醇、高浓度乙醇 逐级洗脱，再用乙酸乙脂萃取，干燥得到脂溶性蟾酥提取物，但该提取方法的步骤复杂， 而脂溶性蟾酥的提取率较低，提取时间较长，脂溶性蟾酥变性率高，树脂分离得到的脂 溶性蟾酥纯度较低。另外申请号为00136668.8的中国发明专利申请，则公开了用微波 加热消解萃取，萃取温度为30～60℃，萃取时间为1～10小时，萃取液经3～7小时减 压浓缩，再用射流干燥得到蟾酥提取物，该方法萃取时间也较长，萃取温度较低，萃取 率相应较低，萃取后未分离纯化，蟾酥提取物成份复杂，得到的脂溶性蟾酥更易变性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用蟾皮微波萃取脂溶性蟾酥的方法，该方法 具有萃取时间较少，提取率较高，脂溶性蟾酥变性少，能较好地分离蟾毒灵、华蟾酥毒 精和酯蟾毒配基，且分离得到的脂溶性蟾酥纯度较高等优点。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用蟾皮微波萃取脂溶性蟾酥的 方法，包括下述步骤：

1)在粉碎的蟾皮中加入浓度为55～100％的乙醇，乙醇与蟾皮(干重计)的重量比 为5～10∶1，得到蟾皮乙醇液。

2)将上述蟾皮乙醇液放入微波消解器中，用功率为400～800W的微波消解加热萃 取，萃取温度为61～95℃，萃取时间为10～50min，得到萃取液；我们通过测定确定脂 溶性蟾酥的最低变性温度为96.47℃，因此选定该萃取温度，即可以降低萃取时间， 又使脂溶性蟾酥的变性较少，突破常规，具有较好的效果。

3)将上述萃取液用1000KDa超滤膜过滤后浓缩得到滤液；浓缩程度按可以在液相 色谱仪分离纯化即可。

4)将上述滤液用液相色谱仪分离纯化，该液相色谱仪的色谱柱为C₁₈，柱温为40℃， 流动相为质量浓度是0.5％，pH值是3.25±0.02，按质量比50∶50配制的磷酸二氢钾- 乙腈混合液，进样量为50μl-100μl，流量为20～70mL/min，蟾毒灵、华蟾酥毒精和酯蟾 毒配基的保留时间分别为7.594min、10.103min和10.741min，分别收集得到蟾毒灵纯 化液、华蟾酥毒精纯化液和酯蟾毒配基纯化液；上述种纯化液可以用波长为296nm检测 确认。

5)将上述蟾毒灵纯化液、华蟾酥毒精纯化液和酯蟾毒配基纯化液分别或合并后浓 缩干燥，得到相应的脂溶性蟾酥；即分别可以得到含较纯的蟾毒灵的脂溶性蟾酥；含较 纯的华蟾酥毒精的脂溶性蟾酥；含较纯的酯蟾毒配基的脂溶性蟾酥；含较纯的蟾毒灵、 华蟾酥毒精和酯蟾毒配基的脂溶性蟾酥。

所述乙醇的浓度为84％，所述萃取温度为94.6℃，所述萃取时间为39.6min；该条 件下蟾毒灵萃取率相对较高。

所述乙醇的浓度为82％，所述萃取温度为83℃，所述萃取时间为36min；该条件下 华蟾酥毒精萃取率相对较高。

所述蟾皮为干蟾皮，所述乙醇与所述干蟾皮的重量比为8～10∶1；干蟾皮萃取时的 乙醇用量要较多，才有较好的萃取效果。