[发明专利]一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯度生物防腐剂，具体地说，涉及一种高纯 度乳酸链球菌素的制备方法。

背景技术

乳酸链球菌素又称乳链菌肽，英文名Nisin，是N型血清的某些 乳酸链球菌在代谢过程中合成和分泌的具有很强杀菌作用的小肽，能 有效的抑制许多引起食品腐败变质的革兰氏阳性菌的生长、繁殖，特 别对耐热芽孢杆菌、肉毒梭菌以及李斯特氏菌有强烈的抑制作用，是 一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。

目前，乳酸链球菌素在食品中已经广泛使用，但纯度普遍较低， 对乳酸链球菌素的提纯又普遍存在工艺步骤多，纯化过程复杂，设备 投入较大且纯度不高等缺点。

发明内容

本发明的在于解决现有技术存在的纯化过程复杂、纯度不高的问 题，提供一种高纯度乳酸链球菌素的制备方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种高纯度乳酸链球菌素的制 备方法，包括下述步骤：

1)先将乳酸链球菌素粗粉溶解于酸溶液、有机溶剂、或酸与有 机溶剂的混合液中；

2)然后搅拌静置、离心分相，取乳酸链球菌素层；

3)再将乳酸链球菌素层用有机溶剂溶解，再次离心分相，去杂， 干燥而成。

其中，所述乳酸链球菌素粗粉中乳酸链球菌素的含量为5-10％。

所述酸溶液的pH为2-6，一般为盐酸、醋酸、硫酸等。

所述有机溶剂可以是：醇类、醚类或羧酸类，比如乙醇、乙醚、 乙酸。

所述乳酸链球菌素粗粉与其溶解液的比例为1∶10-20。

步骤2)搅拌时可以加入食盐使溶液饱和，充分搅拌溶解，静置。 搅拌时间为1-3个小时，静置时间为6-16个小时。盐与乳酸链球菌 素粗粉的比例为0.5-2∶1。

所述离心分相采用离心转速为2000-10000转/分，时间为5-40分 钟。离心后整个混合液分成四层，分别为轻相、乳酸链球菌素层、重 相和杂质层，除去残渣(大量杂质)及轻重相，取乳酸链球菌素层。

步骤3)中用步骤1)所用溶液溶解乳酸链球菌素、离心分相， 去杂、干燥。

所述干燥方法可以是：

喷雾干燥：取离心后的沉淀，用溶液溶解，搅拌均匀，喷雾干燥， 喷雾过程中应不断搅拌保证混合均匀，喷雾干燥后即获得高纯度的乳 酸链球菌素干粉。

真空干燥：取离心后的沉淀，用溶液溶解后抽滤，抽干后真空干 燥，干燥完成粉碎即获得高纯度的乳酸链球菌素干粉。

干燥时所述的溶液为醇类、醚类、羧酸类有机溶剂。

本发明高纯度乳酸链球菌素的制备方法，其工艺步骤简单，所需 设备较少，所得产品纯度达到98％以上。

本发明工艺方法安全、简便、产品纯度高，是一个良好的乳酸链 球菌素纯化技术，可广泛的用于大规模的工业化生产过程中。

具体实施方式

下面用实施例进一步描述本发明，有利于对本发明及其优点、 效果更好的了解，但所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发 明。

实施例1

取Nisin粗品(盐析后经小板框压滤所得的湿粉，乳酸链球菌素 重量百分含量约为7％)300克，粉碎后加入4升盐酸(pH为2)和 2升乙醇，充分搅拌1小时。慢慢加入400克精盐搅拌溶解使溶液饱 和，静置6小时。离心分相(转速为2000rpm)40分钟，离心后整个 混合液分成四层，分别为轻相(主要是乙醇)、乳酸链球菌素层、重 相和杂质层，除去残渣(大量杂质)及轻重相，取乳酸链球菌素层， Nisin层呈灰白色，加入2升乙醇搅拌混匀后，再次离心分相(转速 为2000rpm，40分钟)去除液体，取沉淀层，此时Nisin层呈乳白色， 如颜色不是乳白色需反复离心分相直至颜色呈乳白色。取沉淀物加入 4升乙醇搅拌均匀后进行喷雾干燥，在喷雾干燥过程中应不停的搅拌 使其混合均匀，喷雾干燥后即获得高纯度的乳酸链球菌素产品。

经生物测定最终产品的效价为：39394IU/mg，作为标品的纯品的 效价为40000IU/mg，可知本发明所用的方法制得的乳酸链球菌素产 品纯度为98.49％。

实施例2