[发明专利]一种多粘类芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种类芽孢杆菌，尤其涉及一种多粘类芽孢杆菌 (Paenibacillus macerans)及其应用。

背景技术

作物细菌性青枯病是由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)(俗称 青枯菌)引起的一种系统侵染的毁灭性土传病害，俗称“植物瘟病”。发病 作物茎叶萎蔫下垂至全株枯死，一般田块的发病率为10％-15％，重病田 的发病率高达80％-99％，导致作物产量的严重下降，甚至绝收。病原的 寄主范围广泛，可侵染44个科的数百种植物，包括蕃茄、茄子、烟草、 花生、马铃薯、香蕉等。

虽然不同植物在不同环境条件下的症状和危害程度表现若干差异，但 共同特点是细菌从植株根部侵入，通过增殖和一系列生化活动损坏寄主维 管束输导组织，导致植株失水枯萎，死亡。迄今为止，通过采用抗青枯的 作物品种去防治青枯病的做法是很少的，因为已出现的品种不仅抗性低而 且抗性容易丧失，其他的农业防治手段因受地域条件的限制，也难以大面 积推广。化学防治上，虽然有农用链霉素、铜制剂等药物的出现，但均不 是针对青枯病的防治农药，而且防效差，不稳定，病原菌极易产生抗药性， 因此市场上尚无防治植物青枯病的有效药剂。

目前世界上普遍认为生物防治是解决土传病害最有希望的途径之 一。所以，本领域技术人员迫切需要能够有效防治植物青枯病的新的微生 物制剂和方法的出现。

发明内容

本发明提供了一种防治植物青枯病的多粘类芽孢杆菌，该菌株可在离 体条件下对青枯菌不同生化型菌株的生长产生抑制作用。

一种防治植物青枯病的多粘类芽孢杆菌菌株，经鉴定命名为多粘类芽 胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)ZJU0901，保藏于位于武汉市珞珈山武 汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2009年7月 19日，保藏号为CCTCC NO：M 209157。

其主要形态及生物学特征如下：细胞呈杆状，革兰氏染色阳性，以周 生鞭毛运动。在膨大胞囊内有椭圆形芽孢，在营养琼脂上无可溶性色素。 兼性厌氧。在培养基上的菌落薄，呈星状扩展，菌量多而粘，表面无光泽。 生长物会粘连到培养基上。生长最适温度28-30℃，生长温度范围为 15-50℃。生长最适pH为7.0，生长pH范围为5.6-8.5。

本发明还提供了一种含有上述多粘类芽胞杆菌ZJU0901的菌悬液，制 备该菌悬液可以选用任意细菌培养基，优选采用NB培养基，其有效菌(多 粘类芽胞杆菌ZJU0901)含量优选为10⁷～10⁸CFU/ml，可以直接应用于防 治植物青枯病。

本发明提供了一种无菌滤液，通过如下方法制备：

取含多粘类芽胞杆菌ZJU0901的菌悬液，离心后取上清液，上清液经 微孔滤膜过滤即为无菌滤液。

本发明提供了一种抗菌蛋白粗提液，通过如下方法制备：

取含多粘类芽胞杆菌ZJU0901的菌悬液，离心后取上清液，上清液经 微孔滤膜过滤得到无菌滤液，将乙醇加入无菌滤液中进行沉淀，将沉淀溶 于缓冲溶液中即得抗菌蛋白粗提液。

优选地，所述无水乙醇与菌悬液体积比为1∶1，具有最大的抑菌活性。

优选地，所述缓冲溶液优选为Tris缓冲液，当然也可以选择其它缓冲 溶液，只要不会使抗菌蛋白变性即可，pH在6.0～8.0之间。

本发明还提供了多粘类芽胞杆菌ZJU0901在防治植物青枯病中的应 用。

优选地，所述的植物为蕃茄、茄子、烟草、花生、马铃薯或香蕉。因 为这些植物的青枯病大多由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起 的。所述的植物最好是番茄。

本发明菌株可在离体条件下对青枯菌不同生化型菌株的生长产生抑 制作用，可有效防治植物青枯病。

附图说明

图1为本发明菌株不同处理下番茄青枯病的病害发生情况；

图2为本发明菌株不同处理下番茄青枯病的病情严重度；

图3为本发明菌株不同处理下土壤中青枯病菌含量的变化情况。

具体实施方式