[发明专利]一种固定化酶法合成茶黄素的方法

权利要求书

1.一种固定化酶法合成茶黄素的方法，其特征包括以下几个步骤：

(1)固定化多酚氧化酶的制备

用洗净的茶鲜叶，预冷后加入冷丙酮，在捣碎机中捣碎，抽滤到丙酮无色，将滤渣进行低温干燥，得丙酮粉。称取一定量丙酮粉，加入适量的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH5.6)和少量石英砂、聚乙烯吡咯烷酮，在冰浴中研磨匀浆，匀浆液在离心机中400t r/min离心10分钟，上清液即为粗酶液。将粗酶液以多孔金属铝板为支撑物，经戊二醛联壳聚糖包埋法制得多酚氧化酶金属酶膜。

(2)多酚氧化反应

固定化多酚氧化酶酶膜与30ml 0.1％浓度的茶多酚溶液在pH5.0、通气量20L/min条件下，37℃恒温水浴中反应1h，后补料0.1％浓度茶多酚溶液10ml继续反应1h。

(3)茶黄素萃取

用适量的磷酸二氢钠与等体积乙酸乙酯混合萃取，混合液在80℃水溶液浸提5min，过滤，滤液经减压浓缩，再经三氯甲烷萃取，除去咖啡碱等杂质，然后用磷酸二氢钠和乙酸乙酯混合萃取5次，乙酸乙酯层经减压，冷冻浓缩干燥，粉碎，过筛后得到合格的茶黄素产品。

2.如权利要求(1)所诉，其特征在于采用金属板作为支撑物法固定化多分氧化酶。

3.如权利要求(2)所诉，其特征在于多酚氧化反应底物选择0.1％-0.25％浓度。

4.如权利要求(2)所诉，其特征在于采用分批补料发酵培养，有效地降低生产成本，提高原料利用率。

5.如权利要求(2)所诉，其特征在于通气量选择20L/min。

6.如权利要求(3)所诉，其特征在于用乙酸乙酯直接提取，制备发酵原料液，并与生物发酵有机的组合起来，从而最大程度的降低了生产成本。

本发明采用固定化多酚氧化酶法发酵合成茶黄素该法操作工艺简单，反应条件温和，无污染，适合工业化生产。