[发明专利]一种谷氨酰胺转氨酶制备方法

权利要求书

1.一种谷氨酰胺转氨酶制备方法，其特征包括以下几个步骤：

(1)菌种选择

选择了一株产谷氨酰胺转氨酶转基因菌株，该菌株是通过将来自茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶基因克隆分离后，构成该基因原核表达载体，并通过轮枝链霉菌表达。

(2)菌种培育

将斜面培养基上的菌种以4％的接种量接入种子培养基，于30℃，210r/min培养24h。

(3)摇瓶发酵培养

以8％的接种量，将种子培养基菌种接入发酵培养基，于32℃，210r/min培养18h，降低温度至28℃，培养24h。

(4)补料发酵

发酵液发酵24h时，补加1.5％甘油作为碳源，同时添加1.5％蛋白胨作为氮源培养18h。

(5)谷氨酰胺转氨酶提取

将发酵液以4000r/min离心20min，上清液为粗酶液，粗酶液经微滤膜微滤处理，进一步除去细菌等杂质，滤液再经超滤膜处理，截留得到的产物再经真空浓缩后，喷雾干燥得到纯的谷氨酰胺转氨酶。

2.如权利要求(1)所诉，其特征在于菌株采用产谷氨酰胺转氨酶基因重组菌株，酶活力可比原始菌株提高1.3倍左右。

3.如权利要求(2)所诉，其特征在于斜面培养基为高氏培养基。

4.如权利要求(3)所诉，其特征在于其种子培养基为甘油-蛋白胨培养基，其配方为甘油20g/L，蛋白胨g/L，酵母膏5g/L，MgSO₄ 2g/L，K₂HPO₄ 2g/L，PH7.0。如权利要求(3)所诉，其特征在于采用分段控制温度法，在发酵前期采用较高温度，可以缩短细胞生长的延滞期，减少总的发酵时间，并且可以提高细胞产率，提高糖的利用率。在发酵中后期采用较低的温度(28℃)，可以使酶的比合成速率保持相对较高的值，提高谷氨酰胺转氨酶的发酵水平，获得较高的生产强度。

5.如权利要求(4)所诉，其特征在于补料时3个参量的选择，碳源选择1.5％的甘油，氮源选择1.5％的蛋白胨，补料时间选择24h，此时产酶活力达到最高值。

6.如权利要求(5)所诉，其特征在于所用超滤膜为W1-6KD，其膜通量为400，分子截留量6000，最低截留率达到95％，能100％截留谷氨酰胺转氨酶，达到分离纯化的目的。