[发明专利]一种生物催化2-氯-3-氰基吡啶生产2-氯烟酸的方法及菌株

权利要求书

1.一种生物催化2-氯-3-氰基吡啶生产2-氯烟酸的方法，所述方法包括：在以2-氯-3-氰基吡啶为底物、以红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)经发酵培养获得的腈转化酶为催化剂、以水或磷酸盐缓冲液为溶剂的反应体系中，于pH7～9、25～60℃下进行催化水解反应，制得所述2-氯烟酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述腈转化酶来自红平红球菌CCTCC NO：M 209194经发酵培养获得的含酶细胞，所述反应体系中含酶细胞浓度以含酶细胞湿重计为10～20g/l。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应体系中，底物2-氯-3-氰基吡啶初始浓度为1.0～5.0g/l。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述含酶细胞由如下方法制备得到：将红平红球菌接种至适用于红平红球菌的发酵培养基中，在温度25～30℃、起始pH 6.5～7.0、摇床转速100～300rpm的条件下震荡培养48～72h，离心分离，得到所述含酶细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述适用于红平红球菌的发酵培养基终浓度组成如下：麦芽糖5.0～15.0g/l，酵母粉7.0～18.0g/l，己内酰胺4.0～8.0g/l，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.5g/l，K₂HPO₄·3H₂O 0.1～0.5g/l，KH₂PO₄ 0.1～0.5g/l，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g/l，溶剂为水，pH值6.5～7.0。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)红平红球菌CCTCC NO：M 209194接种至种子培养基，25～30℃培养16～20h，得到种子液；所述种子培养基终浓度组成如下：葡萄糖10.0～20.0g/l，蛋白胨5.0～10.0g/l，己内酰胺4.0～8.0g/l，MgSO₄·7H₂O 0.2～0.5g/l，K₂HPO₄·3H₂O 0.2～0.5g/l，KH₂PO₄0.2～0.5g/l，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g/l，溶剂为水，pH值6.5～7.0。

(2)步骤(1)种子液以3～10％体积比接种至发酵培养基，在25～30℃、初始pH6.5～7.0条件下震荡培养48～72h，离心分离，得到菌体含酶细胞；所述发酵培养基终浓度组成如下：麦芽糖5.0～15.0g/l，酵母粉7.0～18.0g/l，己内酰胺4.0～8.0g/l，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.5g/l，K₂HPO₄·3H₂O 0.1～0.5g/l，KH₂PO₄ 0.1～0.5g/l，FeSO₄·7H₂O0.01～0.02g/l，溶剂为水，pH值6.5～7.0。

(3)将步骤(2)菌体含酶细胞添加至含有2-氯-3-氰基吡啶的反应体系中，所述反应体系中菌体含酶细胞以含酶细胞湿重计浓度为10～20g/l，2-氯-3-氰基吡啶初始浓度为1.0～5.0g/l，于pH7.0～9.0、25～60℃下进行催化水解反应10～12h，制得所述2-氯烟酸。

7.红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)ZJB-09149，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国 武汉 武汉大学，430072，保藏日期：2009年9月4日，保藏编号CCTCC NO：M 209194。