[发明专利]一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法及其配用的试剂盒和其用途

说明书

技术领域

本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法及其配用的试剂盒和其用途。

背景技术

目前血清β-羟丁酸的测定目前检测的方法是酶动力学法，在辅酶I(NAD⁺)存在的条件下，β-羟丁酸在β-羟丁酸脱氢酶的作用下生成乙酰乙酸、还原型辅酶I(NADH)及氢离子，反应生成的还原型辅酶I(NADH)在340nm吸光度的变化可以间接反映病人血清中的β-羟丁酸的浓度。其反应过程如下：

但是此方法易受外源性的干扰。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，而提供一种在酶动力学法反应测定β-羟丁酸的基础上偶联了一步酶反应，从而保证精确度高及其配速度快、操作简单的用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法。

本发明的另一个目的是提供用以实现用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒。

本发明的第三个目的是一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒的用途，用来判断人体酮症酸中毒程度。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法，所采取的措施为：β-羟丁酸与辅酶I在β-羟丁酸脱氢酶的催化下脱氢生成乙酰乙酸和还原型辅酶I，生成的还原型辅酶I和碘硝基四氮唑紫在黄递酶的催化下反应生成最高吸光率在505nm处的红色物质甲月替(formazane)，并在505nm波长处测定红色物质甲月替(formazane)吸光度的变化来定量生物样本中β-羟丁酸的含量，其反应方程式如下：

采取的措施还包括：

在上述的一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法中，上述的反应过程具体为在0.225ml的试剂I中加入6μL的0～4.5mmol/L的β-羟丁酸，并置于37℃水浴5分钟，并读取吸光度A0，加入0.075ml的试剂II，37℃水浴5分钟后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。

在上述的一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法中，所述的试剂I包括100mmol/L的Tris-HCL缓冲液、pH值为8.5的20mmol/L的草酸、2.5mmol/L的辅酶I、1KU/L的黄递酶以及1mmol/L的碘硝基四氮唑紫，所述的试剂II包括1KU/L的β-羟丁酸脱氢酶。

在上述的一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法中，其特征是：β-羟丁酸的含量计算按以下公式进行计算：

β-羟丁酸浓度(mmol/L)＝E_C×ΔA_X/ΔA_C；

其中：A_X＝样本吸光率A₅₀₅

A_C＝标准品吸光率A₅₀₅

E_C＝β-羟丁酸标准品浓度(mmol/L)。

一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒，所述的试剂盒由以下成分组成：包括试剂I，试剂II、β-羟丁酸标准品、β-羟丁酸异常血清对照以及266测试/盒，所述的试剂I包括100mmol/L的Tris-HCL缓冲液、pH值为8.5的20mmol/L的草酸、2.5mmol/L的辅酶I、1KU/L的黄递酶以及1mmol/L的碘硝基四氮唑紫，所述的试剂II包括1KU/L的β-羟丁酸脱氢酶，所述的试剂I为120ml，试剂II为40ml。

在上述的一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒中，所述的每个试剂盒包含试剂I一瓶60ml、试剂II一瓶20ml、β-羟丁酸标准品一瓶1ml、β-羟丁酸异常血清对照一瓶1ml。

一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒的用途，该测定用于判断人体酮症酸中毒诊断。

在上述的一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法配用的试剂盒的用途中，所依据的原理反应方程式如下：

与现有技术相比，本发明的优点在于可线性测定生物样本中β-羟丁酸浓度范围，并应用液体双试剂，测定β-羟丁酸所需样本量少，仅需6μL血清即可，此外，测定时反应时间短，操作简单，适用于大量检测，同时也方便通过测定血中β-羟丁酸的含量可作为糖尿病患者病情变化的指标，为防止并发症的产生和酮症酸中毒形成提供了及时可靠的防治依据。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。