[发明专利]一种用于表皮黑素细胞体外培养的培养基

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种用于表皮黑素细胞体外培养的培养基。 

(二)背景技术

皮肤颜色主要由皮肤制造的色素和皮肤表层所含天然色素的组合所决定。皮肤上皮层表面的表皮中含有能制造皮肤色素(即黑色素)的表皮黑素细胞。色素减退或无色素性皮肤病患者的皮肤黑素细胞缺失、被破坏或无功能，从而在身体各部位出现白斑。 

黑色素不但具有保护作用，在皮肤美学上也至关重要。某些疾病可引起局部黑素细胞破坏、缺失或细胞功能受抑制，影响皮肤色素制造系统，从而导致皮肤色素减退或者色素缺失。此种异常会造成患者心理学和社会学的严重损害。 

白癜风是一种特殊的皮肤色素性疾病，以出现白斑和表皮黑素细胞缺失为主要特征。当前治疗包括光敏剂(如补骨脂素)联合UVA照射、窄波UVB照射或者局部使用(肾上腺)皮质类固醇，但疗效低，并伴随一定副作用(Shaffali and Gawkrodger，2000，Clin Exp Dermatol 25：575)。 

外科移植技术已经应用于白癜风治疗，如负压吸疱移植、刃厚皮片移植或微小皮片移植(Koga et al.，1988，Arch Dermatol 124：1656；Gupta etal.，1999，Dermatol Surg 25：955；Falabella，1984，J Dermatol Surg Oncol10：136；Suvanprakorn et al.，1985，J Am Acad Derm 13：968；Sarkar et al.，2001，J Dermatol 28：540；Pai et al.，2002，J.Eur Acad Dermatol Venereol16：604)。这些治疗在局限性和小面积病损的患者中有效。但对白斑面积大或者白斑数量多的患者，获得足够的移植皮片具有一定困难(Van Geel，N.et al.，2001，Dermatology 202：162)。 

要成功地进行大面积的自体表皮移植，需有大的移植皮片，内含大量细胞，特别是黑素细胞。或者，可通过细胞培养大量扩增自体黑素细胞用于移植。这种方法需要从病人健康皮肤取得黑素细胞，在体外将其培养在合适环境中(可促进细胞增殖、迁移和黑素制造)使之大量扩增，再在合适条件下将细胞移植至病人病变处皮肤，使之恢复正常颜色。 

Lerner等(1987，J Invest Derm 89：219)介绍了黑素细胞移植治疗斑驳病(一种遗传疾病，以先天性缺乏黑色素细胞导致皮肤白斑和白发为特点)。通过皮切活检术获得一小块皮肤，用含有TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate)，异丁基甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)，霍乱毒素及新生牛血清的培养基培养表皮黑素细胞。虽然细胞成功地移植到了色素减退区域，但由于培养基中含有TPA(一种肿瘤促进因子)，使这种培养基不适合用于人类移植。 

U.S.Pat.No.4,757,019介绍了一种人黑素细胞培养基的使用。此培养基包括MEM基础培养基，5％胎牛血清，phorbol 12-myristate13-acetate(PMA，即TPA，10ng/ml)和霍乱毒素(10-8M)。由于这种培养基含有TPA，也不适合用于人类移植。 

Olsson等(1992，Lancet 340：981)报告的表皮黑色素细胞培养基配方，包含PC-1，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，丁酰环腺苷酸(dbcAMP)，青霉素-链霉素。该培养基用于在自体黑素细胞移植中扩增分离到的表皮黑色素细胞。此培养基不包含促进黑色素细胞生长和分化必需的血清。此外，bFGF的浓度(5ng/ml)太低，不能刺激表皮黑色素细胞作足够的生长。而dbcAMP不是一种天然物质，作用时间也很短。另外，对所培养细胞的数量和黑素含量均无量化指标报道，因此，很难评价这一培养基的效率。值得注意的是，Olsson等后来已使用非培养的表皮黑色素细胞移植治疗白癜风(Olsson and Juhlin，1998，Br J Dermatol 138：644)。