[发明专利]ORF7缺陷型水痘病毒株、含有该毒株的疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学和生物药学领域。具体而言，本发明提供了缺陷型水痘病毒株、含有该毒株的疫苗及其应用，为水痘-带状疱疹病毒的治疗和预防提供良好的候选疫苗药物。 

技术背景

水痘-带状疱疹病毒(Varicella zoster virus：VZV，简称“水痘病毒”或“VZV”)是严格种属特异性的病毒，是导致人患水痘或带状疱疹的致病因子。美国专利3985615中公开了P-Oka株通过豚鼠胚胎组织(GPEC)多次传代，产生减毒的V-Oka病毒，制备预防水痘的V-Oka活疫苗。美国专利4000256中叙述了用人胚成纤维细胞WI-38株传代培养VZV病毒10-80次生产VZV减毒疫苗。迄今为止，只有P-Oka株经细胞传代获得的“水痘病毒减毒冈株”(特公昭53-41202号公报)；Lancet 2：1288-1290，1974)为WHO批准的唯一用于预防水痘或带状疱疹疫苗制备的毒株，该毒株制备的疫苗在全球得到了广泛使用[Requirement for Varicella Vaccine(Live)Adopted 1984：WHOTechnical Report Series，No.725，pp.102-104，1985]。 

水痘病毒减毒冈株鉴定的专利CN1163604C，从分子水平上揭示该毒株是由多个不同序列组成的混合株。野毒株可能存在于其中，源于V-Oka疫苗接种者产生V-Oka株的带状疱疹已有报道。故该减毒株的潜在危害性还是存在的，但是，现在还没有其它抗VZV的疫苗株上市。该病毒具有严格种属特异性，人是其唯一的自然宿主，病毒基因的功能研究难度较大；再者该病毒对细胞具有强烈的依赖性，获得可用于转化的VZV病毒DNA非常困难，故该病毒的研究进展较为缓慢。 

随着分子遗传学研究的飞速发展，基因操作手段的不断革新，基 因插入或删除成为发现新基因或研究基因功能的重要手段，突破了VZV基因研究的瓶颈。1993年Jeffrey I.等在“Generation ofvaricella-zoster virus(VZV)and viral mutants from cosmid DNA s：VZV thymidylate synthetase is not essential for replication invitro”一文中通过科斯质粒(Cosmid)实现对腺苷合成酶基因的操作，揭示将终止密码子引入腺苷合成酶基因导致该酶不表达，但不影响病毒生长速率和对阿昔洛韦的敏感性。这项研究开创了体外VZV基因操作方法，为基因功能研究奠定了基础。2000年George W等在“OpenReading Frame S/L of Varicella-Zoster Virus Encodes aCytoplasmic Protein Expressed in Infected Cells”一文中描述了通过基因部分结构删除的方法发现了VZV新基因，即ORF S/L。随着细菌人工染色体(BAC)在研究中的应用，组织培养技术的进步，异种生物间器官移植屏障的突破(联合免疫缺陷型小鼠的开发)，拓宽了种属特异的VZV基因功能研究的空间，可以在体外或动物体内进行VZV基因功能研究。2004年Kazuhiro N.等在“Cloning of thevaricella-zoster virus genome as aninfectious bacterialartificial chromosome in Escherichia coli”一文中揭示被克隆到BAC载体上的VZV Oka株全基因组，可以在大肠杆菌和人胚肺细胞中增殖，BAC可被一同转化到人胚肺细胞中的Cre酶精确切除，产生的重组VZV病毒具有p-Oka同样结构，完全具有亲本病毒的特性。BAC的应用为VZV的功能研究带来了极大便利，加速了VZV基因功能研究进程。2007年Zhang Z.等利用BAC载体和基因同源重组技术揭示多个基因的体内外功能。 

发明内容