[发明专利]一种单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其应用。

背景技术

理论上讲，人体每天都有大量细胞发生突变，但只有极少数突变的细胞能够继 续分裂生长，并且逃脱免疫系统的监视和攻击而形成肿瘤。肿瘤来源于机体自身突 变的细胞，大部分突变细胞的成分与机体正常细胞的成分相同，只有极少数异常表 达的蛋白质和畸形多糖具有免疫原性。由于肿瘤细胞之间存在免疫原性的差异，那 些免疫原性较强的肿瘤可以诱导有效的抗肿瘤免疫应答，易被机体消灭；而那些免 疫原性相对较弱的肿瘤，则能逃脱免疫系统的监视而选择性地增殖，这一过程称为 免疫选择；经过不断的选择，肿瘤的免疫原性越来越弱。

机体有多种抗肿瘤免疫机制，包括细胞免疫和体液免疫，又可分为特异性免疫 和非特异性免疫。抗肿瘤免疫以细胞免疫为主，其中具有免疫记忆功能和特异性的 主要是T细胞，一直受到人们的重视，而非特异性抗肿瘤免疫细胞-自然杀伤细胞 (NK)也日益受到人们的重视。T细胞主要有两类：CD4+T辅助细胞和CD8+细胞毒性 T细胞(CTL)。CD4+T细胞在接受专职抗原提呈细胞(APC)上的MHC抗原复合物和 共刺激分子双重信号后，发生克隆性增值，并释放出多种细胞因子，其中主要为： 白细胞介素2(IL-2)、g干扰素(INF-g)、肿瘤坏死因子(TNF)和淋巴毒素(LT)。 这些细胞因子在调节与活化CTL、巨噬细胞和B细胞的抗肿瘤效应中起重要作用。 CD8+CTL也是在双重信号作用下被活化和克隆增值，CTL必须与靶细胞直接接触才 能产生杀伤作用。目前的研究认为，CTL杀伤作用方式有三种：①CTL与靶细胞接 触产生脱颗粒作用，排出穿孔素(perferin)插入到靶细胞膜上，并使其形成通道，而 粒酶(granzymes)、TNF、分泌性ATP等效应分子进入靶细胞，导致其死亡。其中， 穿孔素造成靶细胞膜损伤，粒酶使DNA断裂，引起细胞凋亡(PCD)。②CTL激活 后表达Fas配体(FasL)，它可被释放到胞外与靶细胞表面的Fas分子结合，传导死 亡信号进入胞内，活化靶细胞内的DNA降解酶，引起靶细胞凋亡。激活白介素1b 转换酶(ICE)或与ICE相关的蛋白酶，引起细胞凋亡。③上述两种方式共存。CD8+CTL 杀伤活性约有2/3来自于穿孔素途径，而Fas/FasL诱导的PCD约占1/3。

T细胞的活化除了通过T细胞受体(TCR)和CD3复合物对抗原进行识别外，还 必须有共刺激分子(costimu1ator)参与。在T细胞激活诱导阶段缺乏共刺激信号，不 仅不能活化T细胞，还会引起T细胞克隆特异性无反应性，导致免疫耐受。共刺激 分子B7是目前公认的第二刺激信号，属于免疫球蛋白超家族成员，最初发现于活 化的B细胞上，它也表达于树突状细胞和活化的巨噬细胞上，除B细胞来源的肿瘤 外，其他肿瘤很少表达B7。共刺激分子的缺乏也是肿瘤的弱免疫原性的重要因素。 B7有两种受体存在于T细胞表面，CD28低亲和力受体和CTLA-4高亲和力受体。CD28 是免疫球蛋白超家族成员，是分子量为44kD的同源二聚体，在95％的CD4+T淋巴细 胞、50％CD8+T淋巴细胞及CD4+CD8+双阳性的胸腺细胞表面皆有组成性表达。CTLA-4 为CD28的同源分子，他们共表达于活化的T细胞表面。CTLA-4的表达量虽然比CD28 低，但它与B7的亲和力是CD28的20倍。B7：CD28通路为IL-2的产生提供了关键 信号。B7与T细胞上的CD28结合产生阳性信号，增强免疫应答；B7与CTLA-4结 合则产生阴性信号，封闭了CD28依赖的T细胞激活，下调免疫反应。

4-1BB/4-1BBL共刺激途径是近几年发现的，4-1BB(CDw137)是肿瘤坏死因子受 体超家族成员，主要表达于T细胞上。其高亲和力配体4-1BBL表达于巨噬细胞和 活化的B细胞上。4-1BBL或抗4-1BB抗体与T细胞的4-1BB结合后可诱导T细胞的 活化与增殖。4-1BB既能协同CD28对T细胞的共刺激作用，也能不依赖于CD28而 发挥共刺激效应。