[发明专利]一种高产聚谷氨酸工程菌株的构建方法

权利要求书

1.一种高产聚谷氨酸工程菌株的构建方法，其特征在于：将含有启动子、同源重组序列和筛选标记的透明颤菌的血红蛋白基因导入γ-聚谷氨酸生产菌细胞内，利用同源重组技术，将血红蛋白基因重组到γ-聚谷氨酸生产菌的染色体上，得到含有血红蛋白基因的重组聚谷氨酸生产菌，其中所述的重组聚谷氨酸生产菌能够成功表达血红蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的γ-聚谷氨酸生产菌为枯草芽孢杆菌或其他可用来生产γ-聚谷氨酸的菌株。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的γ-聚谷氨酸生产菌为枯草芽孢杆菌。

4.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于：所述的启动子为P43。

5.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于：所述的同源重组序列为amyE位点或lacA位点。

6.根据权利要求书5所述的方法，其特征在于：所述的同源重组序列为amyE位点。

7.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于：所述的筛选标记为氯霉素抗性基因。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的透明颤菌基因具有GENBANKAceessionNumber为M30794的5′端第142-582位核苷酸序列。

9.权利要求2或3所述的方法，其特征在于：透明颤菌血红蛋白基因构建枯草芽孢杆菌同源重组载体为pBluescriptsk(+)-amyE-P43-vgb-cat-amyE，又名为pSK-P43-vgb。

10.根据权利要求书9所述的方法，其特征在于：所述的重组载体pSK-P43-vgb通过电转化方法导入γ-聚谷氨酸生产菌株内。