[发明专利]IFN-γ受体基因(B8R)缺失的天坛株重组痘苗病毒及用途

说明书

技术领域

本发明涉及IFN-γ受体基因(B8R)缺失的天坛株重组痘苗病毒减毒载体以及基于此载体构建的表达HIV-1各种抗原(单价及多价)的IFN-γ受体基因(B8R)缺失的天坛株重组痘苗病毒艾滋病疫苗。本发明的天坛株重组痘苗病毒减毒载体能够显著降低痘苗病毒载体的毒力，可以用于构建表达同一病原多种抗原、不同病原多种抗原的多价重组痘苗病毒。本发明的重组痘苗病毒艾滋病疫苗能够诱导高水平的抗人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus，HIV)的体液和细胞免疫应答，并有效提高重组痘苗病毒艾滋病疫苗的安全性及免疫原性。

背景技术

痘苗病毒天坛株(vaccine virus TianTan strain，VTT)为我国消灭天花作出巨大贡献，在活载体疫苗研究应用也十分活跃，重组痘苗病毒疫苗具有效果好、对热稳定性好，接种方便，不需佐剂等优点，然而痘苗病毒接种人体后产生较重的局部反应，特别是在一定比例的免疫缺陷患者中可引起严重的并发症。表达某些免疫原的重组痘苗病毒未能达到理想的免疫效果，如何能在增强重组痘苗病毒的免疫原性同时进一步提高痘苗病毒载体的安全性，学者们作出很多深入的研究。随着新的病毒疾病不断出现，对宿主抗病毒免疫机理的深入了解，构建表达同一病原多种抗原、不同病原多种抗原的多价重组痘苗病毒载体，寻找更多稳定有效的外源基因插入区意义重大。

痘苗病毒基因组编码一些特殊蛋白抑制宿主免疫系统，据文献报道和基因分析，可知痘苗病毒天坛株B8R基因与IFN-γ受体膜外区域具有高度同源性^[1]。IFN-γ在抗病毒及免疫调节方面具有重要的作用。本发明构建缺失IFN-γ受体基因的天坛株重组痘苗病毒载体，研究其毒力改变及B8R缺失区插入外源基因表达的稳定性。进一步提高天坛株痘苗病毒载体安全性、研制表达多价抗原重组痘苗病毒载体。

HIV-1全球流行导致了极高的致病率和病死率，为防治HIV-1的感染，传统的化学药物治疗、免疫治疗以及新的方法得以不断研究、发展，对多数HIV感染者进行HAART，虽可有效抑制病毒血症，延缓病程，但不能清除潜伏的病毒。保护性的疫苗接种是解决防治HIV-1感染全球性问题的最佳途径。科学家们开展了减毒活疫苗、灭活疫苗、重组亚单位疫苗、各种活载体疫苗(腺病毒、金丝雀痘病毒、流感病毒、痘苗病毒、狂犬病毒、VSV、伤寒杆菌、链球菌等载体)的研究，传统的减毒活疫苗及灭活疫苗在HIV防治中存在一些问题。虽然减毒活疫苗在SIV模型证实有效，但在初免疫成年猕猴中存在一定致死率。被HIV-1感染的猩猩仍可被第二种不相关的HIV-1感染。由于活减毒株风险性以及有证据表明无广泛保护性，减毒活疫苗应用的争议尚待进一步研究。在猩猩模型有研究表明，灭活疫苗不能保护HIV-1攻击，不能诱导CTL反应。病毒活载体疫苗和DNA疫苗都既可以诱导细胞免疫，又可以诱导体液免疫反应，表达HIV-1抗原重组痘苗病毒和HIV-1DNA疫苗的联合免疫成为新的疫苗研究策略。

发明内容

为了进一步提高重组痘苗病毒疫苗的安全性及有效性，本发明目的在于提供一种同源重组构建B8R基因缺失区插入外源基因的的IFN-γ受体基因(B8R)缺失的天坛株重组痘苗病毒VTTΔB8RlacZ及其在制备重组痘苗病毒疫苗中的应用。

具体涉及一种B8R基因缺失、表达HIV-1抗原的VTKgpeΔB8R(B8R基因缺失不带lacZ选择标记，TK区插入B’/C型CN54株HIV-1 gagpol env基因)的天坛株重组痘苗病毒recombinant vaccinia virius VTKgpe的艾滋病疫苗，该重组痘苗病毒recombinant vaccinia virius VTKgpe于2004年2月24日在北京保藏，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.1099；涉及一种B8R基因缺失表达HIV-1抗原的VTKgpeΔB8RlacZ(B8R基因缺失为lacZ所取代，TK区插入B’/C型CN54株HIV-1 gagpol env基因)的天坛株重组痘苗病毒的艾滋病疫苗；还涉及一种B8R基因缺失、表达乙型肝炎病毒HBSAg抗原，IL-2的(B8R基因缺失插入HBSAg抗原，TK区插入IL-2基因)的天坛株重组痘苗病毒的乙型肝炎病疫苗。