[发明专利]一种犬瘟热活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种犬瘟热活疫苗及其制备方法，属于兽医生物制品技术领域。

背景技术

犬瘟热(Canine Distemper，CD)，俗称狗瘟，是由犬瘟热病毒(Canine Distemper virus， CDV)感染引起的貂、貉、狐狸等毛皮动物和犬以及熊猫、虎等珍稀动物的一种急性、烈 性传染病，是目前对我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疫病之一。 主要在冬春寒冷季节流行，呈散发、地方流行或暴发。由于犬瘟热的临床表现千变万化， 在临床诊断时易与犬瘟热相互混淆，给临床诊断和实验研究带来了一定困难。

犬瘟热病毒，属副粘病毒科，麻疹病毒属，是螺旋状对称的负链单股不分节的RNA 病毒。大小150～250nm，毒粒子多数呈球形，中心还有宽径为15～17nm螺旋形核衣壳， 有杆状纤突，只含血凝素，而无神经氨酸。CDV对热和干燥敏感，50～60℃，30分钟即 可灭活。由于CDV在炎热季节不能长期存活，故该病流行于冬春寒冷季节。CDV对紫外 线和碱性溶液敏感，可见光容易将病毒灭活，临床上可用3％氢氧化钠(火碱)、漂白粉作为 消毒剂。早在1905年，Carre就提出本病的病原是一种病毒(Carr，Y H.Sur la maladie des jeunes chiens.Compt.Rend.Acad.d.Sc.1905，140：689-690)。1951年，Dedie首次用组织培养 的方法培养出了CDV。Rockborn发现，CDV在原代犬肾细胞上能形成合胞体、星状细胞 与核内或胞浆内包涵体(夏咸柱.养犬大全.长春：吉林人民出版社.1993.9：549-553；殷震， 刘景华.动物病毒学.第二版.北京：科学出版社，1997，10：789-801)。我国于70年代末， 华国荫等先后从国外进口的CDV弱毒疫苗中分离到了多株疫苗株(华国荫，水貂犬瘟热 免疫的研究I.复制鸡胚组织培养弱毒疫苗的研究.畜禽传染病，1980，4：30-35)。

由于犬瘟热有发病急、难以用药物治疗等特点，目前，主要依靠犬瘟热疫苗进行预防， 国内外用于有多种预防犬瘟热的疫苗产品，但在疾病预防的实际应用中，由于存在毒株的 免疫原性良莠不齐、抗原滴度不高等问题，使用的疫苗可能会存在不能产生有效免疫保护 的问题而导致免疫失败的情况出现。同时，国内外的犬瘟热疫苗产品中大都为多联活疫苗， 如果养殖场在未发生过犬瘟热以外疾病的情况下，冒然使用多联活疫苗进行预防，可能会 存在引发犬瘟热以外疾病的风险，这种情况在使用一些制备不规范的产品时尤为严重。

本发明的目的是利用本发明人由野外分离的一株拥有优良免疫原性的犬瘟热病毒弱 毒株，CDV-11株，制备出安全、有效地犬瘟热弱毒冻干疫苗。同时，上述疫苗是一种可以 用于狐狸以及水貂、貉、犬等犬瘟热易感动物的单苗，解决了市场上没有用于狐狸等动物 的有效犬瘟热单苗的问题，填补了市场上的空白，并为控制毛皮动物疾病的扩散提供了条 件。

发明内容

本发明的目的是利用本发明人由野外分离到得一株拥有优良免疫原性的犬瘟热病毒 自然减毒株作为生产疫苗的病毒株，接种到Vero细胞上，收获感染的细胞病毒液，加入冻 干保护剂，用最适合此毒株的冻干曲线进行冻干，制备出安全、有效地、单一成份的犬瘟 热活疫苗。

本发明的犬瘟热活疫苗的生产毒株是来自野外分离到得一株拥有优良免疫原性的犬 瘟热病毒自然减毒株，因此，本领域的技术人员可以想到，本发明的犬瘟热病毒自然减毒 株作为活疫苗生产毒种同样可用于生产犬瘟热病毒抗原制备多联活疫苗。

1疫苗生产用毒株

(1)病毒来源

本发明人由犬瘟热疑似病犬中，采集体温一过性升高的犬内脏和淋巴组织，用细胞传代 方法分离到一株犬瘟热疑似病毒，对该病毒进行了病毒学鉴定，并将细胞培养物接种幼犬。 病毒学鉴定结果表明，PCR检测CDV阳性，其它理化特性和生物学特性符合犬瘟热病毒的特 点；病理解剖学检查结果表明，接种动物没有犬瘟热临床症状，解剖后也均未发现犬瘟热的 病理变化，说明分离到的病毒是犬瘟热弱毒，命名为CDV-11株。本发明制备所用的生产病 毒是一株犬瘟热自然减毒毒株CDV-11株(2009年07月15日该株病毒已送交中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为：CGMCC No.3201)。

(2)病毒株特性