[发明专利]双抗原夹心法乙型肝炎病毒E抗体体外诊断试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种基于双抗原夹心法原理的乙肝E抗体体外诊断试剂盒，其包 括：1)已包被于固相载体的重组HBeAg；2)已进行酶标记的重组HBeAg； 3)底物液；所述已进行酶标记的重组HbeAg为酶与重组HBeAg通过MBS 法偶联。

2.根据权利要求1的试剂盒，其中所述固相载体为微孔板、塑料珠、 塑料管或磁性颗粒。

3.根据权利要求1的试剂盒，其中所述酶为辣根过氧化酶或碱性磷 酸酶。

4.根据权利要求1的试剂盒，其中所述底物液是应用于ELISA的显 色底物液，包含：

显色液A：柠檬酸0.86g，柠檬酸三钠1.735g溶于去离子水中，定容 至100ml，加入H₂O₂ 50μL混匀；

显色液B：①柠檬酸0.8256g、柠檬酸三钠1.6656g和蔗糖6g溶于去 离子水中，定容至96ml，②TMB 0.026g溶于4ml DMSO，将①和②混匀。

5.根据权利要求4的试剂盒，其中所述TMB是3，3，5，5-四甲基联苯 胺、3，3，5，5-四甲基联苯胺硫酸盐、或3，3，5，5-四甲基联苯胺盐酸盐。

6.根据权利要求1的试剂盒，其中所述底物液是应用于CLIA的酶促 化学发光底物液，包含：

反应液A：12.1g Tris，2.95ml浓盐酸，5g鲁米诺，1g苯丙荧蒽， 0.5ml Tween20，定容到1000ml。

反应液B：7.3g柠檬酸三钠，4.4g柠檬酸，1.2ml 30％的双氧水，定 容到1000ml。

7.一种制备乙肝E抗体体外诊断试剂盒的方法，其包括：

1)将HBeAg包被于固相载体；

2)将重组HBeAg进行酶标记；

3)底物液的配制；

4)组装为成品试剂盒；所述已进行酶标记的重组HBeAg为酶与 重组HBeAg通过MBS法偶联。

8.根据权利要求7的方法，其中所述的步骤2)包括以下步骤：

a)将MBS用二甲基酰胺溶解，加入到HRP溶液中，室温反应1小时；

b)用G25凝胶柱层析去除过量的MBS；

c)将已处理的酶液浓缩；

d)把HBeAg加入到酶液中，室温反应1小时；

e)将反应液过凝胶层析柱将偶联物和未偶联物分离，收集偶联物；

f)用乙肝核心抗体亲和柱吸附具有HBeAg活性的偶联物。

9.根据权利要求7的方法，其中所述的步骤3)是配制应用于ELISA 的显色底物液，包括以下步骤：

a)显色液A(100ml，PH 4.7)的配制：

柠檬酸0.86g和柠檬酸三钠1.735g溶于去离子水中，定容至100ml， 加入H₂O₂ 50μL混匀；

b)显色液B(100ml，PH 4.7)的配制：

①柠檬酸0.8256g、柠檬酸三钠1.6656g和蔗糖6g溶于去离子水中， 定容至96ml，②TMB 0.026g溶于4ml DMSO，将①和②混匀。

10.根据权利要求7的方法，其中所述的步骤3)是配制应用于CLIA 的酶促化学发光底物液，包括以下步骤：

a)反应液A的配制：

12.1g Tris，2.95ml浓盐酸，5g鲁米诺，1g苯丙荧蒽，0.5ml Tween20，定容到1000ml。

b)反应液B的配制：

7.3g柠檬酸三钠，4.4g柠檬酸，1.2ml 30％的双氧水，定容到1000ml。