[发明专利]人红细胞膜抗原包被的微球及其应用

说明书

发明领域

本发明涉及血型检测材料和长久保持红细胞抗原活性的方法，特别是涉及人红细胞膜抗原包被的微球及其在人血型的抗体检测中的应用。

发明背景

对人体细胞膜抗原及其特异性抗体的研究和检测是生物科学、免疫学实验研究和临床检测的最基本内容之一。人ABO和Rh血型抗原/抗体检测是临床常规检测项目。血型鉴定是基于抗原-抗体反应导致的细胞凝集反应。使用红细胞表面抗原检测血清中的血型抗体称之为反定型。在临床输血中，必须保证正、反定型法鉴定结果一致，才能确保输血的安全性。

根据携带于红细胞表面的血型抗原与存在于被试血清中的同源抗体之间的免疫化学凝集反应，进一步鉴定血型(反定型检测)，是输血前必须完成的一项实验室检查。目前，大多数的反定型试验，都是以有活力的红细胞表面抗原作为标准抗原。然而，新鲜红细胞不易保存，并且红细胞表面抗原的抗原性随保存时间延长而逐渐降低。这类试剂不仅需要低温(约2-8℃)保存，且最长保存期只有3至6个月。

长期以来，如何保持红细胞抗原的抗原性是生命科学、免疫科学尚未能很好解决的难题。为了解决这个难题，人们曾采取低温冷冻技术，但低温冷冻方法难以保存大量红细胞。而且红细胞的抗原性会随冻存时间延长而削减。另外，红细胞保存困难的问题也限制了其在其他方面的应用，如作为正定型试剂的质控品，或抗红细胞抗体效价测定等领域。目前，新鲜的红细胞试剂存在难以批量获得、有效期短、保存条件苛刻、质量不稳定等问题。因此，有必要对传统血型抗体鉴定方法和红细胞抗原的保存方法做实质的改进。

发明内容

根据携带于红细胞表面的血型抗原与存在于被检血清中的同源抗体之间的免疫化学凝集反应，进一步鉴定血型(反定型检测)，是输血前必须完成的一项实验室检查。目前，大多数的反定型试验，都是以有活力的红细胞血型抗原作为标准抗原。然而，新鲜红细胞不易保存，并且红细胞血型抗原的抗原性随保存时间延长而逐渐降低。这类试剂不仅需要低温(约2-8℃)保存，且最长保存期只有3至6个月。

为了解决这一问题，本发明提供了一种保存人细胞膜血型抗原活性的方法，该方法包括制备红细胞膜血型抗原提取物，然后将制备的红细胞膜血型抗原包被在固体微球上。

根据本发明的一个优选实施方案，其中所说的固体微球是是人工合成的彩色无磁性微球，例如包括但不只限于聚苯乙烯-丙烯酸微球、聚苯乙烯-丙烯酰胺、PMMA微球、PVC微球等有机微球；二氧化硅微球、碳酸钙微球、二氧化钛微球、过渡金属硫化物微球等无机微球；以及无机/有机复合物微球等。

按本发明方法制备的微球可以使人红细胞膜表面血型抗原至少保存一年以上，而不丧失或降低红细胞的抗原活性。

按照本发明的方法制备的红细胞膜血型抗原包被的微球，可以有效地维持和保留红细胞的抗原活性，作为试剂可广泛用于人血型抗体的检测。例如，在临床血型分析实践中，可以作为血型反定型实验的试剂来使用。简单的说，首先将红细胞膜固定包被在微球上，并以该包被有红细胞膜的微球代替红细胞进行血型抗体的检测。另外，如此制备的包被有红细胞膜的微球，也可用于其他使用红细胞抗原的实验室和工业生产实践中，如作为正定型试剂的质控品，或抗红细胞抗体效价测定等领域。

所说的红细胞膜血型抗原，可以是用低渗压或者表面活性剂处理得到的、依附在完整红细胞膜表面上的血型抗原，或者是用有机溶剂处理过的去除杂质的血型抗原提取物。

所说的红细胞膜血型抗原包被，是指用物理吸附或者化学偶联等方式，将红细胞膜或者血型抗原提取物固定在固体微球上。

为了制备红细胞膜抗原，可首先于室温下，在压积的红细胞中加入表面活性剂胀溶红细胞，或者利用低渗透压方法溶胀红细胞，然后反复离心收集沉淀物，即所需要的红细胞膜抗原提取物。

为了制备可包被红细胞膜血型抗原的微球，例如可以依次向乙醇/水的混合物中加入过硫酸铵、苯乙烯和丙烯酸，混匀后通入高纯度氮气。然后置于水浴中(60℃)搅拌并加热(约48小时)，即得到所需的聚苯乙烯-丙烯酸微球。

取如上制备的聚苯乙烯-丙烯酸微球，离心去上清。取适量十二烷基磺酸钠(SDS)加水稀释。再在另一容器内，向无水乙醇中加入染料甲基红，溶解并摇匀后加入到上面配制的液体中。置于水浴(60℃)中加热后(约24小时)，即得到红色着染的聚苯乙烯-丙烯酸微球。当然，也可以使用其他染料物质，将如此制备的聚苯乙烯-丙烯酸微球染成其他所需的颜色。