[发明专利]魔芋葡甘聚糖基质蛋白质分子印迹膜及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种蛋白质分子印迹膜，能够选择性识别结合模板蛋白质分子，其特征在于：以魔芋葡甘聚糖为主要基质，是按以下步骤制备得到的：

魔芋葡甘聚糖充分溶胀后，加交联剂或与其它高分子共混，并加入增塑剂，中和后加入模板蛋白质分子，充分混合后流涎成膜，干燥脱水形成模板蛋白质的分子印迹，加洗脱剂充分洗脱模板蛋白质分子后制成魔芋葡甘聚糖蛋白质分子印迹膜。

2.根据权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜，其特征在于所述交联剂包括环氧氯丙烷、戊二醛等；高分子溶液包括黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、明胶、大豆分离蛋白、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、聚乙二醇等之中的一种或几种的混合物。

3.根据权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜，其特征在于所述增塑剂包括甘油、山梨醇、聚乙二醇、硬脂酸等之中的一种或几种的混合物。

4.根据权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜，其特征在于所述洗脱剂包括：2％～15％(w/v)SDS-2％～15％(v/v)HAc溶液或2％-30％(w/v)的NaCl溶液。

5.根据权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜，其特征在于所述模板蛋白质分子包括：各种天然活性多肽、蛋白质及其修饰物；重组活性多肽、蛋白质及其修饰物等。

6.一种制备权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜的方法，其特征在于按以下步骤制备：

A、溶胀：魔芋精粉经30％～100％(v/v)乙醇充分洗涤后真空干燥，得到魔芋葡甘聚糖(KGM)；KGM加入0.15-2.0mol/L氢氧化钠溶液，搅拌，在40℃下溶胀，得到0.3％～3％(w/v)的KGM的水溶胶；

B、交联：向KGM水溶胶中加入交联剂或其它高分子溶液，并加入0.1％-5.0％(v/v)的增塑剂，20℃-80℃下交联反应0.5-40h，中和至pH7-8，得到魔芋葡甘聚糖凝胶；

C、载质：上述凝胶中加入凝胶体积1％～100％(v/v)的浓度为0.1～30mg/mL的模板蛋白溶液，该蛋白溶液由pH7.0～8.0磷酸盐缓冲液配制而成，内含1‰～5％(w/v)NaCl，室温搅拌，制备蛋白凝胶；

D、流涎成膜：移取全部或部分上述蛋白凝胶平铺于玻璃板上，自然或真空干燥脱水制备得到模板蛋白质的分子印迹膜；

E、洗脱：加洗脱剂2％～15％(w/v)SDS-2％～15％(v/v)HAc溶液或2％-30％(w/v)的NaCl溶液于4℃下充分洗脱，然后反复冲洗，至洗脱液中无蛋白质检出，得到模板蛋白的分子印迹膜。

7.根据权利要求6所述的蛋白质分子印迹膜的制备方法，其特征在于所述交联剂可以为环氧氯丙烷、戊二醛等；所述高分子溶液可以为黄原胶、卡拉胶、海藻酸钠、明胶、大豆分离蛋白、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、聚乙二醇等；所述增塑剂可以为甘油、山梨醇等；所述模板蛋白可以为天然活性多肽、蛋白质及其修饰物，以及重组活性多肽、蛋白质及其修饰物，例如各种多肽、蛋白质、激素、酶、抗原、抗体、细胞因子、疫苗、连接蛋白、融合蛋白、可溶性受体等。

8.权利要求1所述的蛋白质分子印迹膜在分离检测蛋白质领域的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，是将洗脱后的蛋白质分子印迹膜取出，用去离子水洗去表面残留洗脱液和模板蛋白溶液，再用滤纸将表面的液体滤干，加入印迹用蛋白溶液中，封口，置4℃印迹2～32h。