[发明专利]应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法

权利要求书

1、一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，其具体步骤如下：

1)、首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；

2)、构建由pGAP调控β-葡萄糖苷酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化为毕赤酵母基因组；

3)、根据载体上所带的抗性基因筛选重组子作为工程菌株；

4)、将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于25～35℃在生物反应器中发酵工程菌1～2d分泌表达β-葡萄糖苷酶，在发酵过程中用氨水维持pH在4～6；所述液体培养基是由以下组分组成：85％磷酸25～28ml/L，CaSO₄·2H₂O 0.8～1.2g/L，K₂SO₄ 17～19g/L，MgSO₄·7H₂O 13～16g/L，KOH 3.5～4.5g/L，碳源15～45g/L，蛋白胨18～22g/L，Yeast extract 8～12g/L，PTM4 3～5ml/L；所述PTM4是由以下组分组成：CuSO₄·5H₂O 1.5～2.5g/L，NaI·2H₂O0.1～0.2g/L，MnSO₄·H₂O 2.5～3.5g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.1～0.3g/L，H₃BO₃ 0.01～0.03g/L，CoCl₂·6H₂O 1.0～2.0g/L，ZnCl₂ 6.5～7.5g/L，Fe₂(SO₄)₃·7H₂O 20～25g/L，生物素0.1～0.3g/L，硫酸1～2ml/L。

2、根据权利要求1所述的应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于：所述碳源是甘油、油酸、山梨醇、葡萄糖、乳酸或甘露醇。