[发明专利]抗口蹄疫病毒血清型共享单克隆抗体及其识别的抗原表位

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及两株抗口蹄疫病毒(FMDV)的血清型共享性单克隆抗体以及其中一株单克隆抗体所识别的抗原表位，本发明上述单克隆抗体及其识别的抗原表位在口蹄疫诊断或防治中的应用，属于口蹄疫的防制领域。

背景技术

口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，其基因组为单股正链RNA，全长约8.5kb。口蹄疫是严重危害偶蹄动物的重要传染病之一，该病可引起幼畜死亡、产奶量下降、肉食减少、肉品下降、动物的生产性能降低，导致巨大的经济损失。此外，由于贸易的限制和禁止而引起的损失更大，全世界每年由此造成的直接经济损失可达数百亿美元。2005年以来在我国江苏、山东、甘肃、北京、河北等地爆发了Asia1型FMD(Asia1/JS/CHA/05，GenBank登录号：EF149009)，由于在我国江苏省首先分离，被称作Asia1型江苏谱系。该谱系口蹄疫病毒在我国牛群中一经流行，传播趋势迅猛，造成的损失极为严重。本世纪初O型口蹄疫病毒泛亚谱系在中国(O/Tibet/CHA/99，GenBank登录号：AJ539138)及周边国家甚至欧洲(Mason PW et al.J Gen Virol.2003，84(Pt 6)：1583-93)均有流行，给许多国家造成巨大损失。因此，积极开展Asial型和O型口蹄疫(FMD)的研究，对我国FMD的防控具有重要的意义。

口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂，不同血清型、基因型和分离株的口蹄疫病毒其抗原表位和抗原位点都不尽相同，存在广泛的抗原变异。利用单抗逃逸突变株序列分析和交叉中和试验，已鉴定了一些不同血清型FMDV的抗原位点，相关的研究主要来自O、A、C和Asial型FMDV。中和性单抗在保护易感动物抵抗口蹄疫病毒感染过程中起主导作用，而某些相对保守的免疫显性表位可诱导机体产生血清型共享型单抗，对于FMDV感染的诊断具有重要价值。近年来，对于相对保守的VP2蛋白N-末端区域的抗原性研究已有报道，Yang报道的针对FMDV VP2 N-末端的单克隆抗体中，9B4、15F7和F1412SA表位均为胰蛋白酶敏感型，用胰蛋白酶处理表位肽后，表位对单抗的活性消失，表明其表位属于构象型，并包含Lys²(K₂)-Lys³(K₃)或Arg¹³(R₁₃)残基；可是Freiberg报道的单抗13A6和本发明中单克隆抗体4B2情况类似，识别肽段相同且都是非胰蛋白酶敏感型单抗，表明两者表位区域相同或相似，因此将两单抗重链可变区序列进行比对，结果证明二者有相近之处但并非相同的单抗；2007年Wang等对Asia1型毒株YNBS/58的VP1和VP2上主要的抗原区段进行了免疫原性分析，结果发现，D7(VP1的133-163aa)和B1(VP2的1-33aa)两个区段，都能够诱导豚鼠淋巴组织增生，但D7有中和活性而B1无中和活性。当用D7和B1共同免疫豚鼠时，能够诱导出很高水平的中和抗体反应，说明B1(VP2N-末端)对D7(VP1 133-163aa)的免疫原性有促进作用。在VP2的1-33aa区域，存在免疫活性位点，尽管不属于中和性位点，但是该区段内的位点对于主要中和活性位点的免疫反应具有增强和促进作用。对于表位的定位和定性，国外这些研究是用单克隆抗体压力筛选或用合成肽扫描技术，只能确定表位相关的氨基酸或肽段，不能精确地确定表位的位置和性质。我国虽有Asia1型和O型FMDV单克隆抗体的文章发表，然而尚未见到共享表位单克隆抗体的报道；有关FMDV共享表位的精确定位和定性，国内外尚无研究报道。

发明内容

本发明目的之一是提供两株能分别分泌抗FMDV血清型非依赖性的单克隆抗体4B2和3D9的杂交瘤细胞系；

本发明目的之二是提供由上述单克隆抗体4B2所识别的所有血清型FMDV共有表位氨基酸序列；

本发明目的之三是将上述单克隆抗体或共享性表位用于诊断或预防口蹄疫。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一株能分泌抗FMDV非血清型依赖性单克隆抗体的杂交瘤细胞系4B2，其微生物保藏号是：CGMCC No.3103；分类命名：单克隆抗体杂交瘤细胞；保藏时间是：2009年5月18日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。