[发明专利]快速、灵敏和特异地检测痕量小RNAs的旋转式传感器的制造方法

权利要求书

1.这种小RNAs旋转式传感器主要包括三种成份：小RNA探针，F_oF_l-ATP酶以及F_oF_l-ATP酶的支架结构-载色体。

2.根据权利要求1的小RNAs旋转式传感器，其中所述小RNA探针是一种检测内源性小RNA(＜40nt)的寡核苷酸探针，它由三部分组成：第一部分为与核算配基或生物素结合寡聚核苷酸，第二部分为能与成熟小RNA杂交的寡聚核苷酸，第三段由高CG含量组成的可形成发夹结构的寡聚链核苷酸。

3.如权利1和2所要求的，寡核苷酸探针的总长度在30-70碱基之间。

4.如权利1和2所要求的，寡核苷酸探针中能够与成熟小RNA形成互补结构的寡聚核苷酸的长度在15-40碱基之间，而高CG含量的非义链寡核苷酸的大小在10-30碱基之间。

5.如权利1和2所要求的，高CG含量的非义链寡核苷酸能够形成发卡结构。

6.如权利1和2所要求的，寡核苷酸探针中能够与成熟小RNA形成互补结构的寡聚核苷酸中的每一个核苷酸可以是自然无修饰的如DNA、RNA或DNA与RNA的杂合体，也可以是经不同化学方法修饰的，如肽核苷酸(PNA)、闭锁核苷酸(LNA)、或甲氧-或乙氧修饰的核苷酸或脱氧核苷酸。

7.根据权利要求1的小RNAs旋转式传感器，其中所述F_oF_l-ATP酶是一种利用生物分子F1与F0自身偶联的原理产生的由α、β、γ、δ和ε-亚基等组成的F_oF_l-ATPase分子马达传感器。

8.如权利1和7所要求的，其中将F_oF_l-ATP酶的α亚基、γ亚基或δ亚基与相应的探针复合物结合，并且进一步与样品中的靶分子结合来调控分子马达的旋转速度。

9.如权利8所述的α亚基、γ亚基或δ亚基与相应的探针复合物结合，是通过特异的核酸配基与探针分子结合或通过生物素-链酶抗生物素-生物素与探针分子结合。

10.如权利8所述，其中样品中的靶分子是DNA、miRNA、piRNA、siRNA或其它形式的RNA以及它们与蛋白/多肽的复合物。

11.根据权利要求1的小RNAs旋转式传感器，其中所述F_oF_l-ATP酶的支架结构-载色体是一种直径大约100nm的双层磷脂酶体，内含一个F_oF_l-ATP酶，6-11个光能转换复合物。

12.根据权利要求1和11的小RNAs旋转式传感器，它可以单一或阵列的形式组成各种类型的检测和分析芯片。

13.如权利1到10任一项所述的小RNA探针的用途，是利用具有细胞生理状态特异性、组织特异性和发育阶段特异性的一切形式的靶DNA、RNA和它们的蛋白或多肽复合物等作为标志物，进行疾病等的检测和诊断。