[发明专利]一种以蛋白酶作为烟草加工辅助的酶制剂及制备、使用方法有效
| 申请号： | 200910163271.8 | 申请日： | 2009-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN101787362A | 公开（公告）日： | 2010-07-28 |
| 发明（设计）人： | 韩伟;何宝玉;陈应昆 | 申请（专利权）人： | 云南万芳生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/50 | 分类号： | C12N9/50;A24B15/20 |
| 代理公司： | 昆明科阳知识产权代理事务所 53111 | 代理人： | 孙山明 |
| 地址： | 650118 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白酶 作为 烟草 加工 辅助 酶制剂 制备 使用方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种制备以蛋白酶作为烟草加工辅助的酶制剂的方法，该制剂的蛋白酶为pH5.5～9.5枯草芽孢杆菌As1.398发酵生产的中性蛋白酶，酶活力为36000U/mL，其特征是该酶制剂的制备方法包括以下步骤：
（1）将以上微生物来源的中性蛋白酶作为粗品进行精制，即，将蛋白酶粗制品固体以缓冲液溶解，二者比例（W/V）为1g︰10～20mL，3500r/min离心20min，取上清液，加入(NH4)2SO4使其在上清液中的终浓度为42％，静置12h后，4℃ 15000r/min离心30min，取上清液，补加浓度（W/V）为10%的(NH4)2SO4过夜，再一次4℃ 15000r/min离心30min，收集沉淀，将第二次离心后的沉淀与第三次离心后的沉淀合并；
（2）EDTA使蛋白酶酶活性呈可逆的钝化，即，将⑴合并的沉淀用步骤（1）所述的缓冲液用量的一半充分溶解后，加入含0.1% EDTA步骤（1）所述的缓冲液，补体积至步骤（1）所述的缓冲液体积，静置2h，离心，得到酶活性被钝化的上清液；
（3）在获得的上清液中加入浓度0.01%的蔗糖低聚物，上清液与蔗糖低聚物体积比为100 mL︰1 mL，经-8℃冷冻干燥浓缩8～10倍得浓缩酶制剂。
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