[发明专利]通过还原氨基化制备的羟烷基淀粉和蛋白质的偶联物

权利要求书

1.一种制备包含蛋白质和聚合物的偶联物的方法，其中该聚合 物是羟烷基淀粉，所述方法包括：

(a)聚合物与至少双官能化合物反应，所述化合物包含两个官能团M 和Q，一个官能团M与聚合物反应，一个官能团Q是

(i)一个醛基或酮基或半缩醛基，以生成醛基或酮基或半缩醛基官 能化的聚合物衍生物；或

(ii)一个可以化学修饰成醛基或酮基或半缩醛基官能化的聚合物 衍生物的官能团；和

(b)通过还原氨基化作用把聚合物衍生物的至少一个醛基或酮基或 半缩醛基与蛋白质的至少一个氨基共价连接。

2.如权利要求1的方法，其中羟烷基淀粉是羟乙基淀粉。

3.如权利要求2的方法，其中羟乙基淀粉的分子量是2到200kD。

4.如权利要求2的方法，其中羟乙基淀粉的分子量是4到130kD。

5.如权利要求2的方法，其中羟乙基淀粉的分子量是4到70kD。

6.如权利要求1的方法，其中还原氨基化作用在水性介质中进行。

7.如权利要求1的方法，其中还原氨基化作用在NaCNBH₃存在下 进行。

8.如权利要求1的方法，其中还原氨基化作用在pH7.5的pH下进 行。

9.如权利要求1的方法，其中还原氨基化作用在0到25℃的温度 下进行。

10.如权利要求1的方法，其中在(a)(i)中官能团M是羧基或反应性 羧基，官能团Q是醛基或酮基或半缩醛基。

11.如权利要求10的方法，其中包含M和Q的双官能化合物选自 甲酰苯甲酸、4-甲酰苯甲酸五氟苯基酯、4-甲酰苯甲酸N-羟基琥珀酰亚 胺酯、和4-(4-甲酰-3，5-二甲氧基苯氧基)丁酸。

12.如权利要求1的方法，其中在(a)(ii)中官能团M是氨基，官能 团Q是氨基。

13.如权利要求12的方法，其中包含两个氨基M和Q的化合物是 具有2到20个碳原子的任选取代的二氨基烷。

14.如权利要求13的方法，其中该二氨基烷选自1，2-二氨基乙烷、 1，3-二氨基丙烷、和1，4-二氨基丁烷。

15.如权利要求12的方法，另外还包括聚合物衍生物-其得自聚合 物与包含两个氨基M和Q的至少双官能化合物的反应-在氨基Q上与 另一种包含羧基或反应性羧基和醛基或酮基或半缩醛基的双官能化合 物反应，得到具有醛基或酮基或半缩醛基的聚合物衍生物。

16.如权利要求15的方法，其中所述另一种双官能化合物选自甲酰 苯甲酸、4-甲酰苯甲酸五氟苯基酯、4-甲酰苯甲酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、 和4-(4-甲酰-3，5-二甲氧基苯氧基)丁酸。

17.如权利要求12的方法，其中包含两个氨基M和Q的化合物中 的氨基Q是β-羟氨基。

18.如权利要求17的方法，其中氧化该β-羟氨基得到醛基。

19.如权利要求17的方法，其中包含两个氨基M和Q且Q是β- 羟氨基的化合物是1，3-二氨基-2-羟丙烷。

20.如权利要求18的方法，其中使用高碘酸盐进行该氧化反应。

21.如权利要求1的方法，其中蛋白质选自EPO、G-CSF、IFNα、 IFNβ、AT III、IL-2、IL-3、肌红蛋白、SOD和BSA，或选自A1AT、 因子VII、因子VIII、因子IX、tPA、和APC。

22.一种包含蛋白质和聚合物的偶联物，用如权利要求1所限定的 方法得到。

23.如权利要求22的偶联物，其中该聚合物衍生物主要通过偶氮甲 碱和/或氨基键偶联在蛋白质N-末端的氨基上，用于该反应的蛋白质包 含N-末端氨基和至少另外一个氨基。