[发明专利]用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物和化工技术领域。更具体地说，涉及一种用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基、用该培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法以及利用该培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法。

背景技术

薄芝糖肽注射液系用GCL菌株，经液体发酵培养制得薄树芝干燥菌丝体，菌丝体经提取、纯化、稀配、过滤、灌封而制得的灭菌水溶液。

本品具有调节机体免疫功能的作用，对机体非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫等有促进作用；具有抗氧化作用，清除氧自由基，还有促进核酸、蛋白质生物合成作用。临床使用静脉注射或肌肉注射治疗进行性肌营养不良、萎缩性肌强直及前庭功能障碍、高血压等引起的眩晕和植物神经功能紊乱、癫痫、失眠等症，亦可用于肿瘤、肝炎的辅助治疗。

多糖、多肽是薄芝糖肽注射液的主要有效成分，现行国家药品标准中，薄芝糖肽注射液的规格为2ml中含多糖5mg，含多肽1mg，产品中多糖多肽的含量不得低于标示量的90％。

当前工业化规模生产中，单位发酵液中多糖多肽的得量不高，每毫升发酵液平均得多糖0.5毫克，得多肽0.1毫克。

在薄芝糖肽注射液质量标准中，可见异物和热原是两个重要检查项目，因本品是经发酵制备的产品，如生产条件控制不当，很易造成上述两项达不到标准要求，从而降低成品收率。

如何提高单位发酵液中多糖多肽的得量，以及如何改进稀配、灌装工艺，使可见异物、热原两项质量指标稳定合格，对提高薄芝糖肽注射液的技术水平、提高产品质量、降低生产成本方面具有重要意义。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种适合灵芝属薄树芝菌生长、代谢的发酵培养基配方。

该培养基的配方为：黄豆饼粉2.0～3.0％、麸皮粉1.0～2.0％、蔗糖3.0～5.0％、硫酸铵0.04～0.06％、硫酸镁0.05～0.1％、磷酸二氢钠0.1～0.2％、磷酸氢二钠0.2～0.4％、豆油0.4～0.6％、维生素B2 0.00005～0.0002％、赖氨酸0.0001～0.0003％、甘氨酸0.0002～0.0004％，其余为水。

上述培养基的配方优选：黄豆饼粉2.5％、麸皮粉1.5％、蔗糖4.0％、硫酸铵0.05％、硫酸镁0.075％、磷酸二氢钠0.15％、磷酸氢二钠0.3％、豆油0.5％、维生素B2 0.0001％、赖氨酸0.0002％、甘氨酸0.0003％，其余为水。

本发明的另一个目的是提供一种用上述培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法。

本发明的再一个目的是提供一种利用上述培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法。

上述薄芝糖肽注射液的制备方法，包括下列步骤：

a)将灵芝属薄树芝菌株置上述培养基中发酵培养，得菌丝体；

b)将所得菌丝体用醇溶剂进行提取，静置，得薄芝糖肽提取液；

c)将上述提取液进行稀配、灌封、灭菌，得薄芝糖肽注射液；

其中，步骤b)中所述的醇为乙醇、丙醇、1，2-丙二醇中的一种或几种，优选乙醇，更优选75％～95％的乙醇水溶液，最优选85％的乙醇水溶液；

考虑到薄芝糖肽注射液为经发酵得到，为去除产品中蛋白质、鞣质等杂质，故提取液在稀配前，增加了步骤b)中的低温静置过程；具体说，步骤b)中静置的温度为0～15℃，优选2℃；静置的时间为6～16小时，优选10小时；

此外，在注射液稀配过滤灌装过程中，控制药液在较低温度范围内，以防止微生物污染；具体说，步骤c)中对提取液进行稀配、过滤、灌封的过程中，将提取液温度控制在0～20℃，优选控制在4～6℃；

另外，薄芝糖肽注射液属最终灭菌的小容量注射剂，按GMP(药品生产质量管理规范)要求，最终灭菌的小容量注射剂的稀配、过滤和灌封应在10000级空气洁净条件下进行。本发明考虑到产品的特点，为了进一步提高产品的质量，提高了对制造环境的洁净度要求。即，步骤c)中提取液进行稀配、过滤、灌封的过程在10000级背景下局部100级的空气洁净度条件下进行。

采用本发明的培养基培养的灵芝属薄树芝菌菌丝粗壮，单位发酵液中多糖、多肽的产量显著提高，平均每毫升发酵液可得多糖0.8毫克，可得多肽0.14毫克。利用该培养基培养的薄树芝菌制备的薄芝糖肽注射液，其产品质量得到明显提高。其中，可见异物、热原两检查项目符合要求，一次成品合格率达98％以上。

附图说明

图1是本发明的薄芝糖肽注射液工业化规模的生产工艺流程图。

具体实施方式