[发明专利]卷烟烟气遗传毒性的体外细胞微核检测方法

权利要求书

1.一种卷烟烟气遗传毒性的体外细胞微核检测方法，其特征在于：以永 生化人支气管上皮细胞为靶细胞，烟气冷凝物染毒处理，细胞经低渗、高渗处 理，并经两种荧光探针染色，流式细胞仪分析，具体步骤包括：指数生长期细 胞，烟气冷凝物染毒处理，收集细胞进行处理，经EMA探针染色，洗涤后，低 渗溶液膨胀细胞，并对细胞膜打孔处理，RNase A水解RNA，SYTOX与DNA结合， 加入高渗溶液，破碎细胞膜，释放细胞核，SYTOX与DNA结合，梯度离心2500×g、 15min后，进行流式细胞仪分析。

2.根据权利要求1所述的体外细胞微核检测方法，其特征在于：细胞处 理过程如下：取5×10⁵个细胞于15ml聚丙烯离心管中，离心，弃上清，轻打重 悬细胞，加入300μl EMA染液，浸入碎冰，可见光源照射细胞悬浮液，持续 30min，光激活结束后，加入3ml 2％胎牛血清液，以锡箔纸包裹管子避光，上 述溶液离心，弃上清，轻打重悬细胞；于室温下，慢速加入500μl裂解液I， 迅速涡旋，室温放置1h；用力打入500μl裂解液II，涡旋，室温放置30min 后，离心后，弃上清，沉淀颗粒经PBS重悬后，流式细胞仪检测；

所述裂解液I溶液：每毫升溶液中含有氯化钠0.1-1mg，柠檬酸钠1- 10mg，IGEPAL 0.1-1μl，RNase A 0.05-0.5mg，SYTOX 0.25-1μmol， 以去离子水配制；

所述裂解液II溶液：每毫升溶液中含有蔗糖85.6-171.2mg，柠檬酸15 -25mg，SYTOX 0.25-1μmol，以去离子水配制。