[发明专利]检测乳及乳制品中疑似过敏原组分的过敏性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测乳及乳制品中疑似过敏原组分的过敏性的方法，具体是指一种体外以嗜碱性粒细胞肿瘤细胞系对乳及替代制品中疑似过敏原组分的过敏性进行检测的方法。

背景技术

食物过敏又称食物超敏反应、食物变态反应，是指食物进入人体后，机体对之产生异常免疫应答，导致机体生理功能紊乱或组织损伤，进而引发一系列临床症状，如皮炎、哮喘、腹痛和腹泻等多种症状，严重的可导致休克。1995年世界粮农组织公布了八大类食物过敏原，牛乳是主要的过敏原之一。

现有技术中用于检测牛乳及其替代品过敏原的方法有多种。其中，皮肤试验(Skin prinked sting SPT)在临床应用极为普遍，被认为是过敏原评价的较为合理的方法，这种方法虽简便、快速，但其操作不安全，假阳性或假阴性的结果出现率也很高。体外检测技术主要有放射过敏原吸附实验(RadioAllergos orbenttest，RAST)、高压液相层析法(HPLC)、SDS-PAGE电泳、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)等，最初这些方法主要用于区别牛乳、山羊乳、绵羊乳、检测婴儿低过敏食物、乳替代性食物中的过敏原残基，后来逐渐用于加工食品中牛乳过敏原的检测；但这些方法价格多很昂贵，同时在检测和评价过敏原时仍然存在值得注意的问题。

嗜碱性粒细胞在食物超敏反应中起着初级效应细胞的作用，过敏原初次进入过敏体质的机体，刺激机体产生特异性IgE抗体，IgE与嗜碱性粒细胞结合，形成致敏嗜碱性粒细胞，此时机体处于致敏状态；相应变应原再次进入处于致敏状态的机体，通过与致敏嗜碱性粒细胞表面紧密相邻的特异性IgE“桥联”结合，使致敏的细胞脱颗粒，释放组胺、白三烯、激肽和嗜酸性粒细胞趋化因子等一系列具有生物活性的介质，介质作用于效应器官与组织，而产生一系列的临床症状。

组胺释放量是评价过敏原致敏性的常用指标，常用的方法是从过敏患者或致敏动物的周边血液中提取嗜碱性粒细胞进行即时检测，评价过敏原致敏性。例如S.J.Koppelman，M.Wensing，M.Ertmann，A.C.Knulst和E.F.Knol在Relevance of Ara h1，Ara h2 and Ara h3 in peanut-allergic patients，asdetermined by immunoglobulin E Western blotting，basophil-histamine releaseand intracutaneous testing：Ara h2 is the most important peanut allergen(ClinExp Allergy 2004 Apr；34(4)：583-590)中公开了对花生过敏原进行检测的方法。这种通过检测组胺释放量评价食物过敏性的方法，因其提取靶细胞的复杂工艺及细胞不能长期保存的缺点而限制了这种方法的长期连续应用。

现有技术中尚未见关于牛乳及替代制品中疑似过敏原组分的过敏性的细胞检测方法。

发明内容

本发明的主要目的在于建立一种体外细胞检测乳及乳制品中过敏原的方法，将嗜碱性粒细胞应用于体外检测乳及乳制品中疑似过敏原组分的过敏性。

本发明提供了一种检测乳或乳制品中疑似过敏原组分的过敏性的方法，其中主要是以嗜碱性粒细胞对乳及乳制品中疑似过敏原组分的过敏性进行检测。具体地说，该方法包括步骤：

将待测乳或乳制品配成样品溶液，与人嗜碱性粒细胞混合，培养，离心，检测上清组胺含量。

本发明的方法，是应用株化的嗜碱性粒细胞肿瘤细胞系建立体外检测牛乳及替代品疑似过敏原组分致敏性的检测方法。

根据本发明的具体实施方案，所述嗜碱性粒细胞应为致敏嗜碱性粒细胞，即经过与牛乳过敏原特异性IgE抗体结合而敏化后的嗜碱性粒细胞。该嗜碱性粒细胞在与待测乳或乳制品样品溶液混合培养时，当待测样品中含有相应过敏原，便会刺激致敏嗜碱性粒细胞释放组胺。

应用本发明的方法，可以检测乳及乳制品刺激嗜碱性粒细胞释放组胺的百分含量，评价乳及乳制品过敏性，或比较乳及乳制品过敏性差异。

根据本发明的具体实施方案，所述乳及乳制品包括液态乳及乳的替代品如乳粉，更具体地说，所述乳可以为牛乳、羊乳、驴乳或水牛乳；所述乳制品可以为全蛋白乳粉、水解蛋白乳粉或氨基酸配方乳粉。