[发明专利]一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法

说明书

【技术领域】

本发明属于人参总皂苷定量技术领域，更具体地，本发明涉及蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法。

【技术背景】

人参皂苷是人参和西洋参中主要活性成分，是食品、保健品、药品的主要原料，对于这类产品的质量控制，人参总皂苷含量是必测的指标。人参和西洋参为五加科植物，早在东汉《神农本草经》已将人参列为上品，距今已有1600年的历史，西洋参于十八世纪在我国开始栽培利用已有200多年历史。根据2005版《中国药典》记载，它们能治疗体虚欲脱，肢冷脉弱，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷，心力衰竭等。

目前测定人参皂苷单一成分如Re、Rb₁、Rb₂、Rc、Rg₁等有薄层扫描和高效液相色谱法，而测定人参总皂苷则大多采用人参皂苷Re为标准品，香草醛(香兰素)比色法测定，其原理是在酸性条件下将人参皂苷分子水解为苷元和糖基，即：

通过香草醛与苷元反应生成紫红色化合物，其颜色深浅与含量呈正比，用分光光度计或紫外可见光光度计在波长560nm处测定吸光度，计算人参总皂苷含量。由于香草醛显色体系不同，常有香草醛-冰醋酸-高氯酸、香草醛-乙醇-硫酸、香草醛-冰醋酸-硫酸等。但是，香草醛显色体系不稳定，测定结果重复性差，误差大，各实验室间测定误差达4-5倍，甚至有的更高。该方法一直沿用至今而没有改变。

为了解决现有技术的不利之处，本发明人经过多次试验，研究出本发明方法。此外，国内外尚未有采用本发明方法测定人参总皂苷的报道。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，该方法具有测定速度快、重复性好、误差小等优点。

[技术方案]

本发明的原理是在酸性条件下将人参皂苷分子水解为苷元和糖基后，通过蒽酮和糖基反应生成蓝绿色化合物，其颜色深浅与含量呈正比，用分光光度计或紫外可见分光光计在波长590nm处测定吸光度，根据吸光度值确定人参总皂苷的含量。

本发明是通过下述技术方案实现的：

一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，该方法的步骤如下：

(1)玻璃层析柱制备

该玻璃层析柱由15mm×120mm玻璃柱、柱底有砂芯隔板与控制流速的柱活塞组成，柱内装5-10g大孔吸附树脂，在大孔吸附树脂上覆盖1-3g中性氧化铝，在柱装好后先用25ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗柱，然后用25ml蒸馏水洗去保留在柱内的乙醇，使柱内大孔吸附树脂达到平衡；

(2)样品纯化

含有人参总皂苷的液体样品，用干滤纸过滤得到滤液，取所述滤液1-2ml置于大孔吸附树脂玻璃层析柱中，先用40-50ml蒸馏水进行洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到纯化样品；

(3)标准样品制备

取人参皂苷Re和蒸馏水以10-200μg/ml比例置于100ml容量瓶中，混合、溶解并定溶至刻度，取1-2ml所得溶液置于所述大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到标准样品；

(4)显色步骤

将步骤(2)得到的纯化样品和步骤(3)得到的标准样品分别加入2ml蒸馏水；另取一个蒸发皿加入2ml蒸馏水作试剂空白；将0.1-0.3g蒽酮试剂溶于100ml 95-98％(重量)浓硫酸中得到蒽酮显色剂，分别向上述三个蒸发皿加入6ml所述的蒽酮显色剂，放在水浴上加热，此时溶液显蓝绿色；

(5)吸光度测定步骤

让步骤(4)得到的样品、标准样品和试剂空白溶液降至室温，用分光光度计或紫外可见光分光光度计在波长580-620nm处以空白校零，分别测定样品和标准品的吸光度；

(6)人参总皂苷的计算步骤

在步骤(5)测定得到的样品和标准样品的吸光度，按照下述公式计算样品中的人参总皂苷含量：

式中：

C-样品吸光度相当于标准品的含量，单位为μg；C＝标准品含量×样品的吸光度÷标准品的吸光度

V₂-样品滤液总体积(ml)；

V₁-样品上柱体积(ml)；