[发明专利]一种用于检测细胞嵌合状态或个体识别的基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测细胞嵌合状态或个体识别的基因检测试剂盒和核苷酸 序列及其使用方法，属于生物技术领域。

背景技术

利用不同生物个体各自的独特的基因信息来区分不同的个体或细胞的个体来源， 可用于检测与自身免疫病有关的分娩后母子细胞长期存在的微嵌合状态，造血干细胞 或者其他器官移植后供者/受者细胞嵌合状态，白血病造血干细胞移植后微小残留病 等，在法医物证鉴定、亲子鉴定和其他医学检验方面有着广泛的应用。基因组是包含 着一个人所有遗传信息的片段，与生具有，并且终身保持不变。这种遗传信息蕴含在 人的骨骼、毛发、血液等所有人体组织或器官中。由于人类基因组中有着数量众多的 多种类型的多态性位点，不同个体之间往往在很多位点上都有差异，并且进行基因检 测只需微量的标本即可进行。利用基因多态性进行个体识别已经成为法医和临床检测 广泛使用的方法。

近年来已开发出多种遗传标记用于个体识别。其中短串联重复序列(Short Tandem Repeat简称STR)由于检测方法简便、快速、准确度高、扩增片段大小适中，目前已 发展为各法医学实验室最常用的个体识别检测标记。但由于不同的微卫星多态性片段 之间片段大小差异很少(常为3～5个碱基长度)，因此需要高分辨率的电泳方法(聚 丙烯酰胺凝胶电泳或使用测序仪分析)才能进行检测。由于聚丙烯酰胺凝胶电泳操作 复杂，稳定性差，已逐渐趋于淘汰；而测序仪的成本昂贵，限制了此技术的广泛应用。

遗传学上嵌合体(Chimerism)的定义是同一个体体内不同遗传性状的细胞嵌合 或混杂表现。这种一个机体同时有两种或两种以上染色体组成不同的细胞系同时存在 的状态称为嵌合状态。已经发现，分娩后母子细胞长期存在的微嵌合状态，与自身免 疫病有关；造血干细胞或者其他器官移植后供者/受者细胞嵌合状态和预后有关，白血 病造血干细胞移植后微小残留病嵌合状态等和治疗直接相关。对于疾病机理和治疗的 研究、患者病情的检测都有重要意义。例如，在异体造血干细胞移植中，被植入的干 细胞来源于与患者不属于同一个体的供者，这些干细胞植入患者体内后，虽然能够在 患者体内生长自己，但其携带的基因遗传信息仍旧是属于供者的信息，因此便形成了 嵌合现象。因此供受者细胞嵌合状态的监测是造血干细胞移植成功与否的重要指标， 目前多采用STR方法来检测造血干细胞移植后的植入状态。

微嵌合现象(Microchimerism)是指某一个体的少量细胞转移到另一个体内的现 象。一般称混合的细胞中一种个体来源的成分低于1％时为微嵌合，而所有来源的成 分比例均大于1％时为嵌合状态。早在上世纪50年代就已经发现，母亲可能会将自己 的细胞传输给胎儿，并且在胎儿出生后，母体来源的细胞还会长期在孩子体内存在甚 至数十年之久。后来还发现，分娩后母亲的体内也可能会长期携带少量的来源于孩子 的细胞。目前的研究已知这种母子嵌合的现象和一些自身免疫性疾病有关，但还有更 多的机理有待研究者探索。近年来，随着器官移植的应用和研究的深入，研究者还发 现在器官移植中也广泛存在微嵌合现象。如在心脏移植或肾脏移植的患者体内可以检 测到少量来源于供者的细胞长期存在于患者的外周血中，这种微嵌合现象和移植物的 排斥和耐受有关。

与个体识别不同的是，个体识别是用来检测两个标本是否分别来源于同一个个 体，或者是否具有遗传学上的血缘关系；而嵌合状态分析的是在一份标本中，不同个 体来源的细胞成分各占多少。因此，个体识别是根据不同标本的多态性位点信息进行 比较分析，以对其遗传学上是否属于同一个体或是否具有血缘关系进行评估；而嵌合 率的分析是根据已知的分别属于两个或多个不同个体的多态性信息为线索，来定量分 析混合标本中两个或多个不同个体细胞所占的比例。