[发明专利]一种纳米材料毒性检测方法

权利要求书

1.一种利用绿色荧光蛋白检测纳米颗粒物毒性的方法，其特征在于：包括如下步骤1)质粒转化和大肠杆菌培养

(a)取一管100微升DH5α感受态细胞，加入绿色荧光蛋白质粒1微升，混合均匀，冰浴中放置30分钟；

(b)将管放到42℃水浴循环，热击90秒；

(c)将所述管转移到冰浴中2-5分钟；

(d)向冰浴后的所述管中加入常温下700-800微升无抗性的SOB培养基，然后转入到摇床中，37℃下摇动1小时；

(e)取已转化的感受态细胞450微升加入到50毫克/升的卡那霉素抗性的培养基上，等培养基全部吸收后，在37℃下培养12-16小时；

(f)通过菌落PCR鉴定单菌落，确定含有能够表达绿色荧光的蛋白的质粒；

(g)PCR鉴定完毕无误之后，挑选该单菌落接种于含有卡那霉素抗性的LB培养基中，37℃培养12-16小时；

2)纳米材料毒性的检测

(a)将步骤1)中培养得到的含有绿色荧光蛋白质粒的大肠杆菌，用0.9％生理盐水离心洗涤三次，然后用1毫升的含有卡那霉素抗性的M9培养基重悬；

(b)把事先用M9液体培养基准备好的不同浓度的锐钛矿型二氧化钛、金红石型二氧化钛、氧化铜、氧化锌纳米颗粒物的悬浊液依次加入到96孔黑色荧光酶标板孔板上；

(c)通过酶标仪检测不同种类和不同浓度的纳米颗粒物荧光强度变化；

(d)通过1小时内荧光强度变化来评价不同种类和不同浓度纳米颗粒物毒性。

2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：待检测的大肠杆菌在孔板中的密度为1×10⁷个/cm²。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所采用的M9培养基为低荧光背景的培养基。

4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所述的纳米颗粒物在M9培养基中分散的颗粒粒径小于等于100纳米。

5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于所述的纳米颗粒物的粒径为20纳米。