[发明专利]鸡肉风味物质基因诊断试剂盒及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸡肉风味物质基因诊断试剂盒及使用方法，属于分子生物学技术领域。 

背景技术

优质肉鸡业是我国的特色产业，越来越多的消费者开始追求鸡肉的风味，2008年生产量超过42亿只，市场份额已占到肉鸡总产量55％以上，并呈逐年上升趋势。以往只针对肉鸡生长性能和体组成的传统选育，降低了鸡肉风味物质下降，而仅凭传统选育手段，很难达到肉鸡产量、生长性能与鸡肉风味物质同时提高的目标。目前，随着分子生物学技术的发展，利用分子遗传标记来辅助选育既具有良好肉品质风味，又不影响肉鸡生长速度和体重的优质肉鸡品种已成为现代家禽育种的发展方向。 

优质肉鸡育种中肉质性状的选育是关键环节，而肉质的风味是肉质性状的一个非常重要的指标。肌肉肌苷酸(IMP)含量是影响肉质风味的重要因素，而腺苷琥珀酸裂解酶(ADSL)是IMP合成过程中的关键酶之一，对于最终肌肉肌苷酸含量具有重要的影响。肌内脂肪(IMF)与肉质和口感呈正相关，影响肉质的嫩度、剪切力、风味和多汁性，而脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)的遗传变异对肌内脂肪(IMF)的含量有显著影响。近几年的研究表明，ADSL基因(季从亮等，2004；束婧婷等，2007)和A-FABP基因(Gerbens等，1998；叶满红，2003等；罗桂芬等，2006)，是影响肉品质风味的主效基因或与主效基因相连锁的基因，可作为鸡肉风味物质选择的分子遗传标记。 

连接酶检测反应(ligase detection reaction，LDR)LDR是利用高温连接酶实现对基因多态性位点的识别。通过多重PCR(Multiplex PCR)获得含有待检测突变位点的基因片段，高温连接酶一旦检测到DNA与互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配，则连接反应就不能进行，最后通过测序仪电泳读取检测结果。该技术具有特异性高、检测快速、通用性强、适用范围广、成本低廉等特点，目前已成功应用于人类疾病相关基因分子标记的SNP检测和基因诊断试剂盒的研发。 

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡肉风味物质基因诊断试剂盒及使用方法，在于为鸡肉风味物质相关基因的检测提供一种快速、简便、价格低廉的基因诊断方法，有利于筛选出风味物质含量最高的肉鸡个体，指导鸡肌肉风味物质的分子标记选育。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸡肉风味物质基因诊断试剂盒，其特征是，所述的试剂盒包括ADSL基因PCR扩增的上下游引物混合物P1、ADSL基因LDR反应的探针的混合物L1、A-FABP基因PCR扩增上下游引物混合物P2、A-FABP基因LDR反应的探针的混合物L2及Tag酶和DNA连接酶。 

ADSL基因PCR扩增的上下游引物混合物P1表示的信息为： 

ADSL上游引物序列5’-CACTGCTGTCCCAAAGCTG-3’  ， 

ADSL下游引物序列5’-GCAGGCAGGAAAATGAAAGT-3’。 

ADSL基因LDR反应的探针的混合物L1表示三根探针，三根探针表示的信息为： 

A探针ADSL_MODIFY序列： 

5’P-GAAGTTGCTCCAAGGTGAATGATGGTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM 3’ 

B探针ADSL_C序列： 

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTACCGTGTTATCCCCTACGTAACAG-3’ 

C探针ADSL_T序列： 

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACCGTGTTATCCCCTACGTAACAA-3’。 

A-FABP基因PCR扩增上下游引物混合物P2表示的信息为： 

A-FABP上游引物序列5’-GACCAGTTTGTGGGCACCT-3’， 

A-FABP下游引物序列5’-TTTCTCACCCAGCTCTTTCA-3’。 

A-FABP基因LDR反应的探针的混合物L1表示三根探针，三根探针表示的信息为： 

D探针A-FABP_MODIFY序列： 

5’P-AAGTTTTCACTAGAAAGGAGCTTCCTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM 3’ 

E探针A-FABP_C序列： 

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTACCCAGCTCTTTCATATAGTCCTCG-3’