[发明专利]蚯蚓纤溶酶抗肝纤维化的应用

说明书

一、技术领域

本发明涉及蚯蚓纤溶酶(即蚓激酶)抗肝纤维化的应用，属于生物技术领域。

二、背景技术

1.肝纤维化是一切慢性肝病的共同的病理基础，是发展到肝硬化必经的中 心环节。肝纤维化是肝细胞的细胞外基质(主要为胶原蛋白、其次为结构糖蛋 白、糖胺多糖和弹性蛋白)的分泌大于降解，因而造成细胞外基质过度沉积的 病理过程。

肝纤维化的病因大致可分为感染性(慢性乙型、丙型和丁型病毒性肝炎、 血吸虫病等)，化学代谢缺陷(慢性酒精性肝病、慢性药物性肝病)，先天性 代谢缺陷以及自身免疫性肝炎等。

单就乙型肝炎而言，全世界乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者超过2.8亿；我 国是乙型肝炎高流行区，有1.3亿人口是HBsAg携带者，慢性乙型肝炎患者超过3000 万，其中25-40％的患者可发展为肝硬化或肝癌。每年我国死于乙肝后肝硬化、肝癌 患者达40万人。肝穿刺标本分析表明，轻型慢性肝炎患者发生肝纤维化者占62.6％， 中度、重度慢性肝炎患者100％出现肝纤维化。

近年的基础和临床研究表明，肝纤维化尤其早期肝纤维化是一种可逆的病理过 程，除了有效的病因治疗，如果能直接抑制肝细胞外基质的合成和/或促进其降 解，则已经形成的肝纤维化甚至早期肝硬化也是可以逆转的。因此，抗纤维化治 疗已成为国内外肝病专家关注的热点。

彻底治疗慢性肝炎的原发病不能完全代替抗纤维化治疗，如同有的患者HBeAg 已转阴，但肝纤维化仍在进展。抗纤维化药物的作用分为抑制胶原蛋白的合成、分泌 与沉积以及促进细胞外已经沉积的胶原蛋白的降解。因此抗纤维化治疗主要针对两个 方面进行：(1)抑制肝星状细胞活化，抑制肝星状细胞的胶原合成，促进肝星状细 胞凋亡；(2)抑制细胞外基质(extracellular matrix，ECM)合成、增加细胞外基质降 解；抑制基质金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitor metalloproteinase-1TIMP-1)的 合成、提高基质金属蛋白酶(matrix metal-loproteinase，MMPs)活性。

对于慢性肝纤维化的治疗尚无理想药物，目前主要用干扰素-γ、甘草甜素、秋水 仙碱、中成药安络化纤丸。前者属于抗病毒治疗，前两种药肌肉或静脉注射，6个月 为一疗程；秋水仙碱口服有疗效但毒副作用较大、需连服一年；安络化纤丸日服 12-16g、有一定疗效、有一定副作用。

我们前一阶段用多组分的蚯蚓粗提物-“地龙2号”进行了抗肝纤维化试验：Wistar 雄性大鼠每周2次皮下注射C-Cl4制造肝纤维化动物模型，阳性对照组以秋水仙碱灌 胃，试验组用不同剂量“地龙2号”灌胃、每日1次，试验共8周。试验结束时取大鼠 肝脏、作组织切片、HE染色、显微镜观察。结果显示：“地龙2号”灌胃产生显著的 抗肝纤维化效果，优于秋水仙碱的治疗效果，而且未见明显毒付作用。通过免疫组化 和RT-PCR方法，对各组大鼠肝组织中基质金属蛋白酶(MMP-13)与基质金属蛋白 酶组织抑制物(TIMP-1)的蛋白含量以及mRNA的表达进行分析：“地龙2号”治疗组 MMP-13的表达明显升高，TIMP-1的表达显著下降，MMP-13/TIMP-1的mRNA 表达的比值也显著下降。同时，试验组肝星状细胞的活化受到明显的抑制。由此， 我们曾经推测，可能是“地龙2号”中含量较高的两种蛋白酶-蚯蚓胶原酶、蚯蚓纤 溶酶(即蚓激酶)口服产生的效果；同时推测，与细胞外基质的主要成分-胶原蛋白 对应的蚯蚓胶原酶、可能是抗肝纤维化的最主要成分。这当然只是未经验证的推测， 它无法确定哪一种蛋白酶或者两种活性物质怎样的配比才真正有效，更无法确定抗 肝纤维化新药的配方与含量。本发明通过大量的后续系列实验结果，推翻了前一阶段 的推测。