[发明专利]建立系统性红斑狼疮OAZ基因应用模型的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种人类Olf-1/EBF相关锌指蛋白(Olf-1/EBF associated zinc finger protein，OAZ)，特别涉及建立系统性红斑狼疮OAZ基因应用模型的方法。

背景技术

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是典型的非器官特异性自身免疫病，以T、B细胞异常活化产生大量自身抗体为特征，被认为是自身免疫病的原型。目前该病的具体发病机制尚不清楚，一般认为遗传因素在狼疮发病过程中起重要作用。目前，治疗系统性红斑狼疮主要药物有激素和免疫抑制剂，它们对人体免疫过程的多个环节均有明显的非特异性免疫抑制作用，从而暂时抑制T、B细胞异常活化来达到治疗的目的。但是，由于这些药物治疗系统性红斑狼疮没有特异性，所以只能缓解病情，不能达到根治的目的。并且它们会产生严重的毒副反应，甚至可能成为患者死亡的直接原因之一，因而在临床应用中受到一定限制。

究其原因，主要是对该疾病的发病机理仍然不清楚，研究模式原始和简单，没有一个从根本上对系统性红斑狼疮发病机制进行分析、选择和实验的生物模型。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述缺陷，研制一种建立Olf-1/EBF相关锌指蛋白基因的系统性红斑狼疮模型的方法。

本发明的技术方案是：

建立系统性红斑狼疮OAZ基因应用模型的方法，其主要技术步骤在于：

(1)采集并分离被测者外周血单个核细胞，提取RNA，逆转录为cDNA，加入相应的引物，进行实时荧光定量PCR以分析OAZ基因的表达水平；

(2)用Spearman相关统计软件分析OAZ基因的表达量与系统性红斑狼疮疾病活动相关性；

(3)采集并分离患者外周血单个核细胞，用OAZ小干扰RNA在体外对培养细胞进行干扰，然后分离细胞和上清液，从细胞中提取RNA，逆转录为cDNA，用实时荧光定量PCR分析不同分组OAZ信号通路相关基因OAZ表达水平的变化，ELISA法测定上清液中IFN-γ、IL4、IL10、IL12、IL21、CCL2、ANA浓度；

(4)将特异性选择OAZ基因位点作为药物干预靶点；

(5)构成系统性红斑狼疮OAZ基因应用模型。

通过这个模型，研究人员可以发现系统性红斑狼疮患者OAZ基因功能存在异常，即系统性红斑狼疮OAZ基因的表达量与SLE疾病易感性、活动性成正相关。运用RNAi干扰技术可有效降低狼疮患者外周血单个核细胞中OAZ信号通路相关基因表达，同时减低多种细胞因子及抗核抗体水平。因此，科研人员就可以借助该模型，根据不同患者的个体差异进行特异性选择，作为药物干预靶点，以选择适当的药物对该干预靶点进行干预治疗研究，从而大大提高疗效，避免盲目用药给患者带来的强烈的副作用。

本发明的其它优越之处在下面将进一步进行阐述。

附图说明

图1——本发明实施例1基因cDNA引物序列示意图。

图2——本发明实施例1SLE患者与正常人OAZ基因mRNA表达示意图。

图3——本发明实施例1SLE患者与正常人OAZ基因mRNA表达图。

图4——本发明实施例1SLE患者外周血OAZ基因表达与SLEDAI相关性示意图。

图5——本发明实施例1SLE患者外周血OAZ基因表达与与补体C3相关性示意图。

图6——本发明实施例10AZ基因表达与SLEDAI、肾脏损伤指数与补体C3相关性图。

图7——本发明实施例1SLE患者外周血抗ds-DNA抗体阳性组与阴性组OAZ基因mRNA表达示意图。

图8——本发明实施例1SLE患者外周血ENA抗体阳性组与阴性组OAZ基因mRNA表达示意图。

图9——本发明实施例1外周血抗体阳性组与阴性组OAZ基因mRNA表达图。

图10——本发明实施例2基因cDNA SiRNA和引物序列示意图。

图11——本发明实施例2RNAi后OAZ基因mRNA表达示意图。

图12——本发明实施例2RNAi后上清液细胞因子与ANA表达(X±S)示意图。

图13——本发明实施例2干扰后OAZ基因mRNA表达水平与细胞因子水平相关性示意图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。