[发明专利]氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种氯霉素免疫原、包被原，属于免疫学技术领域。

背景技术

氯霉素最初是从委内瑞拉链丝菌的培养液中提取制得，现在用化学合成法大量生产。是一类广谱抗生素。对革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌均有抑制作用。其中对伤寒杆菌、流感杆菌和百日咳杆菌物作用比其它抗生素强，对立克次体感染如斑疹伤寒也有效，但是对革兰氏阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。

2002年的上半年，围绕着动物源性食品中国与欧盟之间引发了一系列贸易纷争。2002年1月28日，欧盟以氯霉素残留为由宣布全面禁止从中国进口动物源性食品。此项“禁令”封杀了中国每年约7亿美元的相关产品出口。中国方面迅速就此作出回应。2月7日，英国以氯霉素超标为由停止销售中国蜂蜜，2月中下旬，英国食品标准局在市场上抽样检测中查出我国蜂蜜含欧盟禁用药物——氯霉素残留，发生了上市中国蜂蜜被召回的恶性事件。并影响到了中国蜂蜜对日本、加拿大等国的出口。中国国家质检总局专门就氯霉素音量先后下发了两个紧急通知(国质检食函[2001]510号、国质检食函[2001]578号)，禁止在出口水产品的饲料、养殖(包括环境、器械等的消毒)、加工、保鲜、包装和运输等生产环节使用氯霉素，并要求各地检验检疫机构加强对出口，限期整改，对如期验收不合格的企业将取消其出口注册资格，禁止其产品出口。2002年8月21日农业部和国家质检总局发出联合通知，声明将对中国水产品进行专项整治，以尽快削除药物对中国水产品的危害。我国农业部第235号文规定动物性食品中氯霉素残留限量为不得检出。然而由于氯霉素抑菌效果好且价格低廉，目前我国仍有部分养殖主将氯霉素用于治疗家畜、禽类疾病。为了保障人民健康及扩大与世界各国食品贸易往来，必须对氯霉素残留进行监控。

氯霉素是小分子化合物，常用的检测方法有高效液相色谱分析法(HPLC)或液相色谱/质谱联用分析法(LC/MS)。这些方法普遍存在着仪器昂贵，方法复杂，操作烦琐，试剂消耗量大的局限性。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测，基于免疫学检测原理，操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和设备，特别适于现场检测。能够在第一时间检测水产品中氯霉素残留，对遏制氯霉素的非法使用具有重要意义。但是目前市面上的氯霉素胶体金速测产品存在检测限无法满足国家限量要求的现状。解决此问题在于以下两个途径：(一)改善抗体质量和竞争物。而改善抗体质量还在于优化免疫原结构；(二)改善包被原结构，从而从竞争物的角度优化抗原抗体识别。

发明内容

针对上诉问题，本发明提供了一种氯霉素免疫原、包被原，该免疫原、包被原能极大提高氯霉素胶体金速测的灵敏度。

本发明的另一个目的是提供该免疫原、包被原在胶体金试纸生产中的应用。

上述氯霉素免疫原的制备包括以下步骤：

(1)氯霉素半抗原的合成；

(2)氯霉素半抗原活泼酯的合成；

(3)氯霉素半抗原活泼酯于血蓝蛋白进行偶联；

(4)免疫原的纯化；

(5)免疫原蛋白浓度的确定，分装。

所述的半抗原具有式(I)所示结构：

所述的免疫原具有式(II)所示结构：

上述氯霉素包被原的制备包括以下步骤：

(1)氯霉素半抗原的合成；

(2)氯霉素半抗原活泼酯的合成；

(3)氯霉素半抗原活泼酯于人血清蛋白进行偶联；

(4)包被原的纯化；

(5)包被原蛋白浓度的确定，分装。

所述的包被抗原具有式(III)所示结构：

发明通过以下途径应用于氯霉素胶体金试纸的生产：

(1)将氯霉素免疫原免疫试验动物生产氯霉素抗体；

(2)胶体金颗粒的制备；

(3)胶体金标记氯霉素抗体；

(4)样品垫的制备，该垫附置一段胶体金标记氯霉素抗体的膜；

(5)氯霉素固相硝酸纤维素膜的制备，该膜包被一条含氯霉素包被原的检测带和一条包被羊抗鼠IgG的质控带；

(6)样品垫的处理：选择适当的封闭试剂、表面活性剂和(或)非离子型去污剂单独或以适当比例组合后均匀浸于玻璃纤维素膜，室温干燥备用；

(7)组装氯霉素胶体金试纸条，该试纸条用PVB作为背衬，在PVC衬板的中部叠置硝酸纤维素膜，两端分别叠置吸水垫和样品垫，硝酸纤维素膜和吸水垫、样品垫相搭连。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：