[发明专利]Toll样受体9阻断剂及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种阻断剂，特别涉及一种Toll样受体9(TLR9)阻断剂及 应用。

背景技术

病原微生物感染人体通常引起全身或局部的免疫炎症反应。以往普遍认为 微生物的蛋白质、脂多糖是主要的免疫刺激源，而最近研究发现微生物中特有 的非甲基化CpG核苷酸序列片段(CpG-ODN)同样具有免疫刺激作用，从而提 示抗炎、抗过敏的策略不仅仅局限于传统的方法，而需要考虑清除非甲基化 CpG-ODN导致的致炎作用。

非甲基化CpG-ODN的致炎机制与哺乳动物的众多免疫细胞上具有TLR9受 体(Toll like receptor 9)有关。TLR 9受体为I型跨膜蛋白，能特异性地 识别来自病原微生物中非甲基化CpG-ODN中的CpG-motif结构，与其结合后， 能触发经典的TLR信号级联，通过MyD88、IRAK、TRAF-6信号通路，活化MAP 激酶、NF-κB等转录因子。这些因子启动了保守的前炎症过程，导致TNF-α 等前炎症介质的大量释放，继而引发后续的炎症效应。因此，寻找阻断由TLR9 介导的前炎症反应，对于临床感染导致的抗炎抗过敏治疗具有积极的意义。

虽然CpG-ODN是已明确的TLR9配基，但是不同结构的CpG-ODN仍然具有 不同的特性，主要表现在以下两个方面：一是种属特异性，如：(1)CpG-ODN 1826对鼠免疫细胞有很强刺激作用，而对人的免疫细胞没有作用；(2)CpG-ODN 2216对人有作用，对鼠无作用；(3)CpG-ODN M362对两者均有作用；二是效 应强度差异，开始发现的主要刺激性CpG-ODN片段，后来研究发现有些CpG-ODN 片段被认为具有中和作用，能消除刺激性CpG-ODN的致炎效应，然而，迄今不 明确是否通过TLR9拮抗方式来起作用，更不明确这些CpG-ODN的结构特征， 更同时，也未见通过阻断TLR9受体来进行抗炎、抗过敏的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Toll样受体9(TLR9)阻断剂及应用。所述阻 断剂能特异性与TLR9结合，有效阻断其它刺激性配基与TLR9的结合，抑制由 此受体介导的前炎症效应，可用于抗炎、抗过敏的辅助治疗。

本发明的技术方案是：

Toll样受体9特异性阻断剂，其特征在于：所述阻断剂为非甲基化CpG 核苷酸序列片段，其核心结构为CGCG核苷酸序列。

所述非甲基化CpG核苷酸序列片段的长度为12-30个核苷酸。

所述非甲基化CpG核苷酸序列片段的核心结构CGCG位于序列第4-7位点。

所述非甲基化CpG核苷酸序列片段的侧翼序列为来自微生物基因组核苷 酸序列或人工设计的核苷酸序列结构。

所述非甲基化CpG核苷酸序列为骨架为全硫代，其分子结构为 NNNCGCGNNNNNNNNNNNNN。

Toll样受体9特异性阻断剂用于制备抗炎、抗过敏的辅助治疗药物以及 制备免疫炎症的实验用试剂的应用。

本发明所述核心结构为CGCG核苷酸序列的非甲基化CpG核苷酸序列片段 能与TLR9发生特异性结合，并阻断其它具有刺激性配基与TLR9结合，具有较 高亲和力，一般不具有炎症刺激性，没有细胞毒性，能够到达拮抗并阻断其它 刺激分子与TLR9的结合，从而抑制前炎症效应。

本发明所述的CpG-ODN可用于辅助治疗抗微生物感染所致的过度炎症和过 敏性疾病，以及作为生物医学科研试剂辅助有关炎症和过敏的研究，具有广泛 的应用前景。用于临床抗炎、抗炎过敏辅助治疗药物，其作用靶点明确、阻断 活性较高、安全性好的优点。本发明所述的CpG-ODN可以注射剂或输液剂等形 式给药。

本发明所述的CpG-ODN体外实验证明，所述阻断剂能够显著阻断等当量的 刺激分子，一般地，两倍于刺激剂或2μM阻断剂能够较为完全地阻断1×106 个免疫细胞上的TLR9受体。

上述CpG-ODN可以通过化学合成的方法获得。

附图说明

图1为MTT检测CpG-ODN c41对RAW264.7的细胞毒性；

图2为MTT检测CpG-ODN c32对RAW264.7的细胞毒性；

图3为MTT检测CpG-ODN c35对RAW264.7的细胞毒性；

图4为MTT检测CpG-ODN c41对人巨噬细胞的细胞毒性；