[发明专利]猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的制备方法及其制品

权利要求书

1.一种用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)用传代细胞培养猪瘟病毒弱毒株和伪狂犬病病毒弱毒株；

(2)收获所述步骤(1)得到的细胞培养毒液；

(3)把所述步骤(2)得到的两种细胞培养毒液按1∶2比例混合，并在混合液中加稳定剂和抗生素，经冷冻真空干燥得到传代细胞猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗。

2.根据权利要求1所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括如下步骤：

(1a)制苗用细胞的传代与培养：所述传代细胞经EDTA-胰酶细胞分散液消化传代，用细胞生长液继续培养，形成传代细胞单层；

(1b)细胞毒种的繁殖：将新鲜脾毒制成病毒悬液，接种至所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，继续培养，每隔4～5日收获换液一次，取二收、三收的细胞培养毒液作为猪瘟活疫苗生产用毒种；将所述伪狂犬病病毒弱毒株接种至所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，用细胞维持液继续培养，2～3日后收获细胞培养毒液作为伪狂犬病活疫苗生产用毒种；

(1c)制苗毒液的繁殖：

猪瘟活疫苗制苗毒液的繁殖：取所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，弃去所述细胞生长液，接种所述步骤(1b)中得到的含猪瘟病毒的细胞维持液，继续培养；

伪狂犬病活疫苗制苗毒液的繁殖：取所述步骤(1a)中得到的传代细胞单层，弃去所述细胞生长液，接种所述步骤(1b)中得到的含伪狂犬病病毒的细胞维持液，继续培养；

3.如权利要求2所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(2)收获所述细胞培养毒液为：

将含猪瘟病毒的维持液接种到传代细胞单层后培养，接毒后5日作第一次收获换液，以后每隔4日收获换液一次，收获的毒液置于-15℃以下保存；

将含伪狂犬病病毒的维持液接种到传代细胞单层后培养，接毒后2～3日收获细胞培养毒液，收获的毒液置于-15℃以下保存；

4.根据权利要求2所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1a)、(1b)和(1c)中的细胞培养所用的温度为36℃-37℃。

5.根据权利要求2所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1b)和(1c)中的接种时的接种量为1％～5％体积百分比的生产用细胞毒种的维持液。

6.根据权利要求2所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1a)中的细胞生长液为含90％～92％体积百分比的MEM液、8％～10％体积百分比的犊牛血清和抗菌素，所述细胞生长液的pH值为7.0～7.2。

7.根据权利要求2所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1b)和(1c)中的细胞维持液为含95％～98％体积百分比的MEM液、2％～5％体积百分比的犊牛血清和抗菌素，所述细胞维持液的pH值为7.2～7.4。

8.根据权利要求1-7之一所述的用传代细胞制备猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的方法，其特征在于，所述传代细胞选自猪睾丸传代细胞ST、猪肾传代细胞PK15和猪肾传代细胞IBRS-2。

9.一种猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗，其特征在于，所述猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗通过权利要求1所述的方法得到。