[发明专利]测定土茯苓乙醇水溶液提取物中的总苷有效成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析方法领域，具体地说是测定土茯苓乙醇水溶液提取物中 的总苷有效成分的方法。

技术背景

土茯苓为百合科植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb.)的干燥根茎；具有除 湿，解毒，通利关节。用于湿热淋浊、带下、痈肿、瘰疬、疥癣、梅毒及汞中 毒所致的肢体拘挛，筋骨疼痛。由于在采收、流通、临床应用等环节不太注重 品种的鉴别，因此在土茯苓生产经营中品种比较混乱。例如：Smilax属菝葜S. china L.为混淆品。黑果菝葜S.glauco-china Warb.在四川南川作红土苓， 江苏镇江称“鲜土苓”，为地方习用品。白土苓为同科肖菝葜属(Heterosmilax 属)植物华肖菝葜H.chinensis Wang、短柱肖菝葜H.yunnanensis Gagnep.及 肖菝葜H.japonica Kunth.的根茎。前两种为白土苓的主流种，在四川、湖北、 河北、山东、新疆、宁夏、浙江等地分布及使用。

CN1772170A公开了”土茯苓总苷提取物及其制备方法和用途”，具体是用 土茯苓药材经乙醇水溶液提取，用乙酸乙酯纯化的方法得到土茯苓总苷。土茯 苓总苷为土茯苓药材经过提取、纯化的具有活性成分的一类物质的总称，用于 治疗各种炎症和免疫性疾病。对于土茯苓总苷的质量控制，目前还未见文献报 道。中药提取物为多组分的复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的， 能提供丰富鉴别信息的检测方法。中药指纹图谱技术已成为公认的控制中药质 量的有效手段之一。因此建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药材提取物 中所含化学成分，进而对其质量进行整体描述和评价。

发明内容

本发明的目的是建立土茯苓乙醇水溶液提取物中的总苷的标准指纹图谱， 并用此方法来测定土茯苓乙醇水溶液提取物中的总苷中的有效化学成分，作为 土茯苓总苷的质量控制及真伪鉴别的指标之一。

本发明的技术方案是采用高效液相色谱法建立以落新妇苷色谱峰为内参比 峰为特征峰的标准指纹图谱，具体是采取如下方法：

(a)供试品溶液的制备：精密称取土茯苓乙醇水溶液提取物(简称土茯苓 总苷，以下同)的干粉1g，置于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解，再稀释至刻 度，摇匀，得土茯苓总苷供试品溶液；

(b)对照品溶液的制备：取落新妇苷对照品，用甲醇溶解配成每1mL含0.1 mg落新妇苷的溶液；

(c)色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱， 流动相：由A相为甲醇，B相为0.3％(V/V)的乙酸水溶液组成的梯度洗脱液； 流速为0.8mL/min；检测波长325±2nm；柱温为30±5℃；理论塔板数以落新妇 苷峰计算，不低于3000；

(d)测定：分别吸取落新妇苷对照品溶液及供试品溶液5μL，注入高效液 相色谱仪，依法测定，记录色谱图。

按照本发明所提供的方法测定土茯苓总苷，以落新妇苷的色谱峰为内参比 峰，其保留时间为1，计算相对保留时间，得土茯苓总苷的标准指纹图谱至少有 10个特征共有峰。

1号峰平均相对保留时间(简称RT，以下同)0.580，相对标准偏差(简称 RSD，以下同)为0.13％

2号峰RT为0.651，RSD为0.12％

3号峰RT为0.666，RSD为0.13％

4号峰RT为0.730，RSD为0.13％

5号峰RT为0.833，RSD为0.08％

6号峰RT为0.964，RSD为0.06％

7号峰RT为1，此峰为内参比峰

8号峰RT为1.085，RSD为0.30％

9号峰RT为1.116，RSD为0.05％

10号峰RT为1.164，RSD为0.06％。

本发明的优点如下：

1)以土茯苓总苷建立起来的HPLC指纹图谱，代表着土茯苓总苷中有主要药 理活性的有效成分，能表征土茯苓总苷的质量。

2)以土茯苓总苷整个指纹图谱作为一个整体来评判，避免了因只测定一、 二个化学成分而判定土茯苓总苷整体质量的片面性。

3)本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。 下面结合实施例和附图进一步阐述本发明的技术方案